[发明专利]检测磺胺类药物的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学发光检测试剂盒及其测试方法。特别是检测饲料、蜂蜜、组织、牛奶等样本中磺胺类药物残留量的磁颗粒竞争直接化学发光检测试剂盒。 

技术背景

因磺胺类药物具有抗菌谱广，能抑制大多数革兰氏阳性菌和阴性菌，性质稳定便于长期保存，价格比较便宜，又有长效、中效、短效等各种抑制剂的优点，不仅广泛用于人类，还广泛用于兽医临床，在动物的防病、治病方面具有显著的疗效。他们的用药方式可以使添加药饲料、水剂、丸剂或针剂。通过将磺胺类药物用于家禽以预防球虫病、霍乱和感染性鼻炎；在水产品养殖过程中用于控制疔疮和长败血症等；同时还可以亚临床治疗剂量，作为饲料添加剂，用于防病和促进动物生长，以提高奶牛、生猪的抗病能力和增进其食欲，提高产奶量和产肉量。 

由于此类药物在体内作用和代谢时间较长，若不按规定要求合理的使用与停药，易引起在动物体能残留，并通过奶、肉、蛋借食物链以低剂量传递，从而影响人类健康。因此，国内外对磺胺类药物等残留均有限量要求，并有逐步严格控制的趋势。 

目前磺胺类药物的检测方法有抑制微生物法、高效液相色谱法(HPLC)，气相色谱-质谱法(GC-MS)、液相色谱-质谱法(LC-MS)和酶联免疫吸附法(ELISA)等方法。 

1、抑制微生物法涉及到微生物培养。还需培训专门技术人才和建立专用实验室，准备工作繁琐，检测所需时间较长，技术含量较高。 

2高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检 测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。 

3、气相色谱-质谱法(GC-MS)灵敏度很高，假阳性率低。该方法的主要缺点是样品需要衍生化这样复杂的前期处理。虽然经过衍生化处理的样品能在质谱中给出更多的结构信息，但是衍生化会产生多个不同的产物并导致样品的部分丢失，造成实验结果的偏差。 

4、液相色谱-质谱法(LC-MS)，样品不需要衍生化处理，可对尿液、血液、肝脏、毛发和眼球样品进行检测。LC-MS/MS联用，可进一步提高信噪比，所以可用于对阳性结果的确认手段。但是，无论LC-MS还是LC-MS/MS，仪器检测法与GC-MS一样，并未能解决仪器造价昂贵，操作步骤繁琐，样本前处理复杂，对操作人员专业素养要求高等问题。 

5、酶联免疫法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在： 

1)非均相反应：检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。 

2)酶催化反应：借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种磺胺类药物检测试剂盒，采用该试剂盒进行磺胺类药物的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。 

本发明的另一个目的在于提供一种磺胺类药物的测试方法，该方法操作简 单，灵敏度高，特异性好。 

实现上述目的，本发明提供一种磺胺类药物检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。 

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。 

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。 

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的磺胺类药物半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。 

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。 

所述的荧光素标记物是FITC标记磺胺类药物单克隆抗体。