[发明专利]检测青霉素G的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及兽药残留检测分析领域，具体的涉及一种检测动物组织、牛奶、蜂蜜中的青霉素G残留量的磁颗粒竞争直接化学发光检测试剂盒。

背景技术

青霉素G(Benzy/penicillin，BPG)是应用广泛的抗生素，用于预防、治疗、诊断动物疾病或者有目的的调节动物生理机能，合理使用可以有效控制动物疾病，提高动物的成活率，保证养殖业的健康发展。但动物摄入过量的青霉素G会导致在动物性食品中高残留量。当人食用含青霉素G残留超标的食品后，会引起过敏反应和产生耐药性。因此欧美国家和我国已相继要求限量使用。

目前，青霉素G的检测方法有微生物检测法、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)和酶联免疫法(ELISA)等方法

1、微生物法是我国近年来才开始的研究，该方法的可靠检测限可达0.1ug/ml，低于国家规定残留量的最高限量。该方法灵敏度高。操作简便、检测结果准确，但其涉及到微生物培养，还需培训专门技术人才和建立专用实验室，技术含量仍然很高，一般检测单位很难做到。

2、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点。HPLC法的主要缺点是仪器价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。

3、液相色谱-质谱法(LC-MS)，样品不需要衍生化处理，可对尿液、血液、肝脏、毛发和眼球样品进行检测。LC-MS/MS联用，可进一步提高信噪比，所以可用于对阳性结果的确认手段。但是，无论LC-MS还是LC-MS/MS，仪器检测法与GC-MS一样，并未能解决仪器造价昂贵，操作步骤繁琐，样本前处理复杂，对操作人员专业素养要求高等问题。

4、酶联免疫法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在：

1)非均相反应：检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。

2)酶催化反应：借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种检测青霉素G药物的磁颗粒化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行青霉素G的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。

本发明的另一个目的在于提供一种青霉素G残留的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。

实现上述目的，本发明提供一种青霉素G检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的青霉素G半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。

所述的荧光素标记物是FITC标记青霉素G单克隆抗体。

本发明还提供一种利用试剂盒检测青霉素G的方法，包括下列步骤：

1)分别吸取20μl-100μl标准品或样本，然后加入20μl-100μl发光标记物，再加20μl-100μl荧光素标记物，充分混匀后，37℃温育15min；

2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150μl，混匀后在37℃温育5min；

3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500μl冲洗复合物沉淀；

4)上述清洗步骤重复2-4次；