[发明专利]检测链霉素的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学发光检测试剂盒及其应用法，特别是检测动物性食品和饲料生产中链霉素残留量的磁颗粒化学发光检测试剂盒。

技术背景

链霉素(Streptomycin)是氨基糖苷类抗生素的一种，对格兰是阴性菌和部分革兰氏阳性菌特别是结核分歧杆菌具有显著的抗菌活性。链霉素主要作用域细胞的核糖体，通过抑制细菌蛋白质的生物合成而呈现杀菌的作用。正是由于其独特的抗菌活性，所以自1943年首次在灰色链球菌属中发现链霉素以来，他被广泛用于多种疾病的治疗和动物饲料添加剂，并在人、畜传染病的防治方面发挥了巨大作用。同时，链霉素对人又有一定、有时甚至是严重的毒副作用。链霉素引起的主要毒副作用是耳毒性。因其能选择性的损害第八对脑神经，导致前庭功能损害和耳蜗神经损害。严重时可造成永久性的耳聋。

链霉素对鸡、羊、牛、猪的各类炎症有很好的疗效，所以现在经常被添加到动物的饲料中，用于动物疾病的预防和治疗。但凡使用过链霉素的动物，在一定时期内其产品都有残留，所以在动物食品中残留会对人类健康造成威胁和影响。

我国对食品中链霉素残留的测定方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、微生物法和酶联免疫吸附法(ELISA)等。

1、高效液相色谱法(HPLC)具有检测精度高、假阳性率低的特点，HPLC法虽然是一种较理想的药物残留分析方法，但链霉素分子中没有紫外发光团和荧光团，在化学分析中需要见他转变成具有紫外发光团或荧光团的衍生物才能进行分析，这给检测工作带来了极大困难。而且HPLC法使用的仪器价格昂贵，检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理较复杂。

2、微生物法是我国近年来才开始的研究，该方法的可靠检测限可达0.1ug/ml，低于国家规定残留量的最高限量。该方法灵敏度高。操作简便、检测结果准确，但其涉及到微生物培养，还需培训专门技术人才和建立专用实验室，技术含量仍然很高，一般检测单位很难做到。

3、酶联免疫吸附法(ELISA)是20世纪70年代出现，用于微量物质的检测，最早应用于传染病、肿瘤标志物、激素水平等临床检测，90年代开始在我国食品安全检测领域推广应用，目前依托ELISA技术的试剂盒、试纸条已经成为食品安全快速检测领域的主导产品，同时也是我公司研发和销售的主要产品类型。酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度较高、特异性较好，技术操作简易，容易掌握，确实解决了大量的以前难以解决的许多微量小分子物质如抗生素、激素、农药残留等的定性、定量分析工作，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用。但是，ELISA方法存在许多自身无法克服的缺陷，主要表现在：

1)非均相反应：检测过程中为分离游离物与结合物，需要多步洗板过程，耗时费力，难以提高操作的自动化程度。

2)酶催化反应：借助酶催化底物显色，测定反应液吸光度值。反应的时间与温度对酶活力存在较大影响，试剂稳定性差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种检测链霉素的磁颗粒化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行链霉素残留的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。

本发明的另一个目的在于提供一种链霉素残留的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。

实现上述目的，本发明提供一种链霉素检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的链霉素半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。

所述的荧光素标记物是FITC标记链霉素单克隆抗体。

本发明还提供一种利用试剂盒检测链霉素的方法，包括下列步骤：

1)分别吸取20μl-100μl标准品或样本，然后加入20μl-100μl发光标记物，再加20μl-100μl荧光素标记物，充分混匀后，37℃温育15min；

2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150μl，混匀后在37℃温育5min；