[发明专利]人干扰素与靶向肽的融合蛋白及其制备

说明书

技术领域：

本发明涉及一种人干扰素和靶向肽的融合蛋白及其工程菌的构建和融合蛋白的制备。 

背景技术：

干扰素(Interferon，IFN)是由英国科学家Isaacs和Lindeman于1957发现的。IFN是人和动物细胞受到病毒感染，或者核酸、细菌内毒素、促细胞分裂素等作用后，由受体细胞分泌的一种具有高度生物学活性的糖蛋白，是机体防御系统的重要组成部分，分子量为15,000-21,000道尔顿。 

干扰素被发现时，人们以为其抗病毒活性为其唯一特性，随着研究的不断深入，干扰素还表现出极强的抗肿瘤、免疫调节活性。因而，干扰素的研究越来越受到人们的广泛关注。根据其来源、序列、活性等方面的区别，干扰素最初可分为两族：I型和II两类。I型干扰素主要包括人体内发现的α、β、ω、κ。II型干扰素只有一种γ。 

干扰素的主要生物活性： 

抗病毒活性：对于不同的病毒，IFN通过不同的防御机制，在病毒复制的不同阶段发挥作用，如入侵和脱壳(SV40.、逆转录病毒)、转录(感冒病毒、疱疹病毒)、RNA稳定性(小核糖核酸病毒)、翻译的起始(呼肠孤病毒、腺病毒和痘病毒)以及成熟、组装与释放(逆转录病毒，疱疹病毒)。IFN的抗病毒活性主要通过三条途径完成：双链RNA依赖的蛋白激酶途径(PKR，可抑制病毒蛋白的翻译)、2’-5’系统(可分解病毒RNA)和MX蛋白(干扰病毒的复制和转录)。 

抑制细胞分裂与抗肿瘤活性：干扰素可以抑制细胞增长，控制凋亡，抑制肿瘤。对于细胞凋亡的控制主要是在几种死亡相关蛋白(Death associated protein，DAP)参与下完成的，但是和生长抑制无关。 

调节免疫活性：I型干扰素的抗病毒活性显著，而II型干扰素的调节免疫的活性更强。I型和II型干扰素都可以提高MHC I分子表达，促进CD8+T细胞反应的形成。II型干扰素还可以提高MHC II分子的表达，增强CD4+T细胞反应。干扰素还可以调节蛋白酶体成分和TAP1、TAP2的表达，促进抗原的加工与递呈。同时，IFN-γ促进TH1细胞生成，抑制TH2细胞增殖，活化巨噬细胞，促进对病原体的吞噬。此外干扰素还可以直接调节B细胞的发育与增殖、抗体分泌和重链的转换。 

在专利《内皮抑制素小分子多肽及编码该多肽的核苷酸序列和互补链》(申请号：200610010526.3)中描述了具有30个氨基酸残基的内皮抑制素小分子多肽和其氨基酸序列及生产方法，本发明的靶向肽来源于内皮抑制素小分子多肽，但是氨基酸序列不限于此多肽，本发明靶向肽的氨基酸序列如S1、S2、S3、S4所述，共同特征是含有串联RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)结构，本发明的靶向肽具有抑制人内皮细胞增殖，抑制新生血管，对肿瘤具有靶向作用。 

研究表明，很多存在细胞外基质和血液中的粘附蛋白都包含RGD(精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸)三肽作为细胞识别位点。所有粘附蛋白的RGD序列都能被结构相关的整合素受体家族中的至少一个成员识别并粘附。能被RGD序列识别和结合的整合素包括α₅β₁、α_vβ₁、α_IIbβ₃、α_Vβ₃、α_vβ₅、α_vβ₆等。