[发明专利]DiI 显微颗粒简易制作及其标记神经元的方法

权利要求书

1.一种DiI显微颗粒简易制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

将DiI颗粒溶解于纯乙醇或纯二甲基亚砜中，形成0.01～0.1g/ml DiI溶液；

将DiI溶液加入人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，DiI溶液迅速以薄膜形式漂浮于人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液上，析出粒径3-10微米的DiI显微颗粒。

2.如权利要求1所述的一种DiI显微颗粒简易制作方法，其特征在于，将DiI溶液分次加入人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，一次加入1-5微升。

3.如权利要求2所述的一种DiI显微颗粒简易制作方法，其特征在于，将DiI溶液装入玻璃微电极中，将玻璃微电极的尖端伸入人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，使用微量注射仪脉冲式一次推入1-5微升DiI溶液。

4.如权利要求3所述的一种DiI显微颗粒简易制作方法，其特征在于，玻璃微电极的尖端内径为50-200微米。

5.一种DiI显微颗粒标记神经元的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)DiI显微颗粒制作

在固定于载玻片上的脑片上滴加人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液，形成人工脑脊液层或0.1mol/L磷酸盐缓冲液层；然后，将0.01～0.1g/ml DiI溶液加入人工脑脊液层或0.1mol/L磷酸盐缓冲液层中；DiI溶液会迅速以薄膜形式漂浮于人工脑脊液层或0.1mol/L磷酸盐缓冲液层上，析出粒径3-10微米的DiI显微颗粒；

2)DiI显微颗粒埋入

使用尖端封闭的玻璃管微电极，将步骤1)制作好的DiI颗粒压入脑片的脑组织内；然后，以人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液清洗脑片或用软毛笔轻轻刷拭以去除附在脑片表面的DiI颗粒；

所述0.01～0.1g/ml的DiI溶液为DiI颗粒溶解于纯乙醇或纯二甲基亚砜中形成。

6.如权利要求5所述的一种DiI显微颗粒标记神经元的方法，其特征在于，步骤1)中的脑片在滴加人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液前，使用0.015～0.02g/ml的多聚甲醛固定液进行固定。

7.如权利要求5所述的一种DiI显微颗粒标记神经元的方法，其特征在于，还包括以下步骤：

3)脑片孵育

将埋入DiI颗粒的脑片避光存放于0.01～0.02g/ml多聚甲醛固定液中，于37℃烘箱或室温下孵育1-4天。

8.如权利要求5所述的一种DiI显微颗粒标记神经元的方法，其特征在于，步骤1)形成的人工脑脊液层或0.1mol/L磷酸盐缓冲液层的厚度为200-500微米。

9.如权利要求5所述的一种DiI显微颗粒标记神经元的方法，其特征在于，步骤1)中将0.01～0.1g/ml DiI溶液分次加入人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，一次加入1-5微升。

10.如权利要求9所述的一种DiI显微颗粒标记神经元的方法，其特征在于，步骤1)中通过将0.01～0.1g/ml的DiI溶液装入玻璃微电极中，将玻璃微电极的尖端伸入人工脑脊液或0.1mol/L磷酸盐缓冲液中，使用微量注射仪脉冲式一次推入1-5微升的DiI溶液。