[发明专利]淫羊藿多糖及其组分和它们用于疫苗佐剂的用途

说明书

技术领域

本发明涉及淫羊藿的多糖提取物，具体地，涉及从中药材淫羊藿叶提取的淫羊藿总多糖及其其中的酸性糖组分和非糖组分，本发明还涉及所述的淫羊藿总多糖及其其中的酸性糖组分和非糖组分用于疫苗佐剂、疫苗组合物和抗体制备的用途。

背景技术

淫羊藿(Epimedium)为小檗硷科(Berberidaceae)植物，常用于补肾壮阳、祛风除湿和益气。现代药理研究表明淫羊藿具有镇咳、去痰、平喘、抑菌等活性。淫羊藿中主要化学成分有黄酮、木质素、生物碱以及多糖等。近年来有以下文献报道有关淫羊藿多糖对动物免疫功能的影响，具体内容如下：

徐颖等(沈阳药科大学学报，2000，17(6)：434-437)采用淫羊藿水煎、醇沉、洗涤和透析获得淫羊藿多糖。该多糖腹腔注射给予环磷酰胺所致的免疫低下小鼠及荷瘤(S180)小鼠，观察对免疫功能的影响。结果表明该多糖50、25mg/kg×7d，可使脾重量指数上升，使下降的溶血素值及空斑形成细胞的溶血能力回升，使下降的白细胞总数上升。小鼠荷瘤后免疫功能低下，皮下注射该多糖50mg/kg×8d可对抗荷瘤引起的胸腺指数下降，，使荷瘤小鼠的血清溶血素、空斑形成细胞的溶血能力及迟发性超敏反应能力有所提高.

王刚等(武警医学院学报，2003，12(3)：194-196)由水煎煮提取、结晶、透析48h方法获得淫羊藿多糖。该多糖12.5、25.0和50.0mg/kg连续给予荷瘤小鼠皮下注射8d。结果表明淫羊藿多糖可显著提高小鼠因荷瘤所导致的胸腺指数下降，溶血素形成减少，溶血空斑值降低以及迟发性超敏反应低下。

靳录洋等(甘肃畜牧兽医，2004，28(3)：7-10)观察不同浓度的淫羊藿多糖(EPS，多糖含量为32.30％)对正常罗曼雏鸡免疫功能的影响。试验结果表明EPS可使外周血淋巴细胞转化率和ND-HI抗体效价明显升高。罗艳等采用相同的淫羊藿多糖，探讨淫羊藿多糖(EPS)对雏鸡免疫功能和禽流感-新城疫重组二联苗免疫效果的影响。结果表明不同浓度EPS均能显著提高淋巴细胞转化率、中性粒细胞吞噬力、AI-HI和ND-HI抗体效价、红细胞-C3b花环率，降低红细胞-IC花环率，且中剂量效果较好

张述斌等(甘肃畜牧兽医，2004，28(4)：24-25)采用Ca(OH)₂水提取工艺制备淫羊藿多糖，苯酚-硫酸法测定糖含量为73.68％。实验结果表明该多糖鸡新城疫疫苗有明显的免疫增强作用，用该多糖免疫后鸡血清中HI抗体效价比对照鸡明显提高，而且维持时间延长。此外，T淋巴细胞ANAE阳性率与HI抗体效价有相应的消长趋势。

孔祥峰等(畜牧兽医学报，2004，35(4)，468-472)用新城疫IV系疫苗免疫雏鸡，在免疫前、后分别注射高、低剂量淫羊藿多糖(糖含量为66.38％)，均能不同程度地提高抗体效价，且与给药时间、剂量和免疫接种次数有一定关系。

尚川川等(动物医学进展，2009，30(4)：23-26)将50、100、150g/L等不同浓度的淫羊藿多糖与灭活的鸡新城疫病毒乳化制备疫苗免疫雏鸡，探讨淫羊藿多糖作为免疫佐剂对鸡免疫功能的影响。结果表明100g/L和150g/L的淫羊藿多糖作为免疫佐剂均可促进抗体的产生，提高脾脏指数，但对法氏囊指数的促进作用不明显。

孙艳等(中国专利，专利号CN1360894)从淫羊藿中提取一种淫羊藿多糖，该多糖是由A部分和B部分组成，包括鼠李糖、岩藻糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖七种单糖，具有明显的促免疫作用，是一种很有发展前途的生物调节剂。适用于乳腺癌、小细胞肺癌、非何杰金淋巴病、非腺癌、胃癌等癌症患者化疗、放疗需要辅助治疗者。

Yang LS等(Vaccine，2008，26：4451-4455)研究黄芪多糖、淫羊藿多糖(糖含量为71.23％)和蜂胶黄酮组成的复方对兔出血病疫苗的佐剂作用。结果表明该复方体外能显著促进T淋巴细胞的增殖，提高T细胞分泌IFN-γ和IL-10的mRNA表达水平，其佐剂作用略强于铝佐剂，对兔出血病有保护作用。

Wang DW等(Vaccine，2006，24：7109-7114)将淫羊藿多糖(糖含量为71.23％)与蜂胶黄酮混和，研究与IL-2免疫协同作用，以及对鸡外周淋巴细胞IL-2和IFN-γmRNA表达水平的影响。结果表明该混合物能提高抗体滴度和IFN-γmRNA表达水平，但与IL-2的协同作用不明显。