[发明专利]用于肥料和肥料添加剂中双氰胺的测定方法

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种(应用高效液相色谱法)检测双氰胺含量的方法，特别是一种用于肥料和肥料添加剂中双氰胺的测定方法(高效液相色谱检测法)。

二、背景技术

双氰胺(DCD)，也称为二氰二胺，是一种已被公认价廉质优的硝化抑制剂，是在生产实际中得到应用的为数不多的硝化抑制剂之一。1918年首次报道双氰胺具有硝化抑制特征，上世纪七、八十年代美国开始把它作为一种硝化抑制剂商品在农业上推广应用，前西德SKW公司利用双氰胺注册了商品名为Didin的硝化抑制剂产品，国内中国科学院沈阳应用生态研究所等科研院所以及部分肥料生产企业，也都利用双氰胺生产长效新型肥料、稳定性肥料、肥料增效剂等产品。当前双氰胺已在国内外广泛应用于缓释肥料或肥料添加剂的生产，系列产品受到世界各国的关注，尤其是在中国、美国和欧洲的市场上。

双氰胺在肥料或肥料添加剂的生产过程中，部分将分解产生氨(双氰胺水溶液在80℃以上时易分解)，必将影响着肥料或肥料添加剂成品中双氰胺的含量，从而影响其应用效果。农田双氰胺的应用，大多的研究结果支持适量的双氰胺对环境和作物无毒害作用的结论(双氰胺在土壤中70天左右降解)，但也有研究表明，双氰胺易随水淋失，施用不当或过量时，容易对作物造成毒害甚至在农产品中残留。双氰胺在肥料或肥料添加剂加工生产中降解情况如何，含有双氰胺的肥料或肥料添加剂中的双氰胺淋失进入水体为人体吸入，以及过量双氰胺导致的农残为人体食用是否会影响人类健康目前尚无确切报道。

双氰胺微毒或基本无毒，急性毒性很小，在药品生产上，双氰胺作为药物加工中间体，是国内外药物成品中必要的检测项。双氰胺作为单氰胺的二聚体，其对小鼠毒害症状与单氰胺三聚体三聚氰胺类似，13000mg/kg剂量的双氰胺和三聚氰胺给药后的小鼠出现一致毒害症状，均出现不安，跳跃，呼吸急促，随后在几十分钟内便死亡。含双氰胺的肥料或肥料添加剂长期或过量施用，其中的双氰胺是否会像三聚氰胺成为一种潜在的危险试剂目前不得而知。因此，虽然目前尚未发现农业生产上出现的施用含双氰胺的肥料或肥料添加剂引起的淋失和农残的现象，尽管如此，鉴于双氰胺作为药物的必要检测项，以及其具有与三聚氰胺相似的小鼠毒害症状，科研人员和生产应用者很有必要对广泛应用于肥料或肥料添加剂生产中的双氰胺进行监测，明确双氰胺的实际含量，防患于未然。

目前国内应用高效液相色谱法对双氰胺的测定，都集中在对药物如盐酸二甲双胍片、盐酸苯乙双胍等中杂质双氰胺的检测，其中双氰胺主要是作为药物加工中间体使用，检测方法大多参照2005年版《中华人民共和国药典》中的方法或修订的方法来测定双氰胺含量。这些方法的不足之处在于，色谱柱价格较高、寿命短，色谱分离时双氰胺峰(峰值)的保留时间较短，难于与溶剂峰基线分离，专属性不够强，色谱条件重现性欠佳，检测限较高，检测灵敏度较低，难以满足微量双氰胺的检测要求等等。此外，更为关键的是应用其中某些方法的色谱条件来检测肥料中的双氰胺含量，未能很好的将双氰胺色谱峰与其它杂峰分开。我国目前对双氰胺作为硝化抑制剂添加入肥料或作为肥料添加剂成分之一的监测尚缺乏，即针对肥料或肥料添加剂中双氰胺含量的检测尚缺乏，因此，很有必要结合我国的实际情况，探索一种适合于肥料和肥料添加剂中双氰胺的检测方法。

三、发明内容

本发明的目的是提供一种用于肥料和肥料添加剂中双氰胺的测定方法(高效液相色谱检测法)，使得成为一种检测限低、检测灵敏度高、回收率高和快速的高效液相色谱检测法。

本发明的创新思路是：采用高效液相色谱法对肥料和肥料添加剂中双氰胺含量进行检测时，都需要摸索和寻找合适的色谱条件，包括色谱柱、流动相、流速、进样体积、柱温、柱压、检测波长等。此外，还需要确定一套与提取方法相匹配的检测方法，这些都直接关系到提取和检测方法的回收率、准确性和灵敏度。所以，为了实现上述目的，本发明需要探索建立一种适用于肥料和肥料添加剂中双氰胺的提取条件和新的色谱条件。

鉴于以上创新思路，本发明所提供的一种用于肥料和肥料添加剂中双氰胺的测定方法，其特征在于该测定方法包括如下步骤：①备好双氰胺标准溶液，及样品前处理：其中样品前处理是指称取定量的样品(包括肥料样品和/或肥料添加剂样品)，加入2倍体积的超纯水，超声提取离心后，上清液经过滤器过滤后得到样品滤液，加水定容；②样品测定：将样品滤液和备好的双氰胺标准溶液分别注入高效液相色谱中，按照色谱条件测定标准溶液和样品中双氰胺吸收峰面积；③结果计算：通过双氰胺标准溶液的浓度与对应吸收峰面积的线性关系曲线，查得样品滤液中双氰胺的浓度，按照公式计算样品中双氰胺的含量。

式中：