[发明专利]一种克氏原螯虾C-型凝集素基因及制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物基因工程技术领域，更具体涉及一种克氏原螯虾C-型凝集素基因，同时还涉及一种克氏原螯虾C-型凝集素基的制备方法，还涉及一种克氏原螯虾C-型凝集素基因(Pc-Clec)及其编码的C-型凝集素多肽的用途。该C-型凝集素多肽制备方法具体涉及将C-型凝集素基因克隆入一种原核表达载体pET8a及转化入原核表达宿主BL21(DE3)，通过诱导表达纯化获得具有凝集功能的重组C-型凝集素多肽。本发明还涉及该重组C-型凝集素多肽对多种细菌及兔红细胞表现出凝集作用。

背景技术

无脊椎动物缺乏获得性免疫系统，完全依赖于先天免疫系统抵抗入侵病原体，包括一系列的细胞与体液免疫反应[Loker ES，Adema CM，et al.Invertebrate immune systems-nothomogeneous，not simple，not well understood.Immunol Rev 2004；198：10-24.]。作为无脊椎动物抵抗病原体入侵的一线防御屏障，先天免疫系统由模式识别受体(pattern recognition receptors，PRRs)组成。在先天免疫系统中，PRRs介导识别“非己”物质，与入侵病原体表面的病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)结合，启动一系列免疫反应，激活宿主防御系统[Lou T，Yang HJ，et al.Purification，characterization and cDNA cloning of anovel lipopolysaccharide-binding lectin from the shrimp Penaeus monodon.Developmental andComparative Immunology，2006；30：607-617.]。PRRs包括凝集素(lectin)、脂多糖结合蛋白(lipopolysaccharide(LPS)-binding proteins)、抗脂多糖因子(anti-LPS factors，ALF)、肽聚糖结合蛋白(peptidoglycan-binding proteins)和β-1，3-葡聚糖结合蛋白(β-1，3-glucan-binding proteins)等等。

其中，凝集素是PRRs的典型代表，为无催化活性、能与细胞表面不同糖类分子特异结合的蛋白或糖蛋白[Marques MRF，Barracco MA.Lectins，as non-self-recognition factors，incrustaceans.Aquaculture，2000，191；23-44.]，普遍存在于各种生物中，在无脊椎动物免疫系统中起关键作用，具体表现在识别“非己”物质与清除入侵物质[Dodd RB，Drickamer K.Lectin-like proteins in model organisms：implications for evolution of carbohydrate-bindingactivity.Glycobiology，2001；11：71R-9R；Vasta GR，Ahmed H，etc.Structural and functionaldiversity of lectin repertoires in invertebrates，protochordates and ectothermic vertebrates.CurrOpin Struct Biol，2004；14：617-30.]。许多凝集素已被鉴定、报道，它们来自各种生物，包括昆虫、软体动物、棘皮动物、放线菌等等。