[发明专利]检测华法林个体化用药相关SNP位点的试剂盒及其多重PCR扩增方法和检测方法

权利要求书

1.一种检测华法林个体化用药相关SNP位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测基因VKORC1 rs9934438 SNP位点的引物、检测基因CYP2C9 rs1799853和rs1057910 SNP位点的引物及检测基因CYP4F2 rs2108622 SNP位点的引物。

2.根据权利要求1所述的检测华法林个体化用药相关SNP位点的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括检测基因VKORC1 rs9934438 SNP位点的两个正向引物及一个反向引物、检测基因CYP2C9 rs1799853 SNP位点的两个正向引物及一个反向引物、检测基因CYP2C9 rs1057910 SNP位点的两个正向引物及一个反向引物和检测基因CYP4F2 rs2108622 SNP位点的两个正向引物及一个反向引物。

3.根据权利要求2所述的检测华法林个体化用药相关SNP位点的试剂盒，其特征在于，所述检测基因VKORC1 rs9934438位点的引物碱基序列如下所示：

正向野生型引物：CCCGGTGCCAGGAGATCATCGACT

正向突变型引物：CCCGGTGCCAGGAGATCATCGACC

反向共用引物：GGAACCAGGTTAGGACTGTCAACCC

所述检测基因CYP2C9 rs1799853位点的引物碱基序列如下所示：

正向野生型引物：GATGGGGAAGAGGAGCATTGAGGACC

正向突变型引物：GATGGGGAAGAGGAGCATTGAGGACT

反向共用引物：ATTTCACAGAATTATGCTACAGGATGTATT

所述检测基因CYP2C9 rs1057910位点的引物碱基序列如下所示：

正向野生型引物：AGGCTGGTGGGGAGAAGGTCAAT

正向突变型引物：AGGCTGGTGGGGAGAAGGTCAAG

反向共用引物：ACCATCCTCTCTTTAAGTTTGCATATA

所述检测基因CYP4F2 rs2108622位点的引物碱基序列如下所示：

正向野生型引物：CGGAACCCATCACAACCCAGCTA

正向突变型引物：CGGAACCCATCACAACCCAGCTG

反向共用引物：ACCAACCCAACCGTACTCTATGGACCT。

4.一种权利要求1所述的检测华法林个体化用药相关SNP位点的试剂盒所采用的检测方法，其特征在于，对受检样本DNA分别用野生型和突变扩增缓冲液进行扩增，在每个反扩增反应中同时对4个目的片段和1个内参片段进行扩增，扩增片段由大到小依次是：内对照1086bp，CYP2C9 rs1799853 766bp，CYP4F2 rs2108622 463bp，CYP2C9 rs1799853 290bp，VKORC1 rs9934438 136bp；扩增后经凝胶电泳即可在紫外光下见到根据片段大小区分开的产物条带，根据条带的有无判断4个SNP位点的基因型。

5.一种采用权利要求1所述的检测华法林个体化用药相关SNP位点的试剂盒多重PCR扩增方法，其特征在于，

预变性由1次循环构成，其条件为：温度为94℃，时间为1分钟；

PCR扩增由第一阶段和第二阶段构成：

第一阶段有32次循环构成，其条件为：

变性：温度为94℃，时间为30秒；

退火：温度为58℃，时间为30秒；

延伸：温度为72℃，时间为90秒；

第一阶段有32次循环构成，其条件为：

延伸：温度为72℃，时间为7分钟；

保存：温度为4℃。