[发明专利]一种栎瘿酸的提纯方法

说明书

技术领域

本发明属于中药提取技术领域，涉及一种从秦艽中提取纯化栎瘿酸的方法。

背景技术

栎瘿酸（Roburic acid），又名栎樱酸，分子式：C₃₀H₄₈O₂；分子量：440.707；分子结构式如下：

栎樱酸是从秦艽中分离得到的成分，秦艽是一种常用中药材，始载于《神农本草经》，具有祛风湿、清湿热、止痹痛、退虚热之功效，用于风湿痹痛、中风半身不遂、筋脉拘挛、骨节酸痛、湿热黄疸、骨蒸潮热、小儿疳积发热。2010版药典一部规定秦艽为龙胆科植物秦艽Gentiana macrophyllia Pall.、麻花秦艽Gentiana straminea Maxim.、粗茎秦艽Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.或小秦艽Gentiana dahurica Fisch.的干燥根。且在鉴别项下增加了以栎瘿酸为对照品的成分鉴别，有效区别了含有龙胆苦苷的秦艽伪品。经检索，在国内尚无制备栎瘿酸的工业生产方法的专利及文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种栎瘿酸的提纯方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种栎瘿酸的提纯方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）酶解：取原料秦艽根，经干燥、粉碎处理，用酶溶液浸泡，水浴酶解2-6小时，并充分搅拌；

（2）提取：将上述酶解物滤过，取滤渣用5-10倍量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

（3）富集：将浸膏过大孔吸附树脂柱，醇水洗脱，收集洗脱液；

（4）纯化：将上述洗脱液减压回收乙醇，用乙酸乙酯萃取，萃取液浓缩后上硅胶柱（硅胶粒度为100-400目），环己烷-乙醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集栎瘿酸流分；

（5）重结晶：减压浓缩栎瘿酸流分至小体积，静置析晶，甲醇/石油醚-丙酮/乙醇回流溶解，放置结晶，滤出干燥得产品。

步骤（1）中所述酶溶液选自纤维素酶溶液或果胶酶溶液中的一种，酶溶液的pH为4.0-4.8，酶解温度为40-50℃。

步骤（2）中所述乙醇水溶液的浓度为65-90%。

步骤（3）中所述大孔树脂选自D4006、X-5、NKA-2、AB-8、D101型中的一种。

步骤（3）中所述醇水洗脱为3-4BV10%-20%乙醇溶液→4-6BV70%-90%乙醇溶液。

步骤（4）中所述梯度洗脱为环己烷-乙醇按体积比由高到低，依次为10:1、5:1、1:1。

本发明采用酶解提取，让有效成分更容易渗出，提高提取率；采用大孔树脂分离，不同浓度乙醇洗脱，除去杂质；使用硅胶柱，环己烷-乙醇梯度柱层析，可得到较纯净的栎瘿酸，产品纯度较高。

 

具体实施方式

实施例1：

取秦艽药材粉碎过50目筛，称取1kg，加8LpH4.4的纤维素酶水溶液（每公斤生药加入140mg纤维素酶）进行浸泡半小时，然后在40℃下水浴酶解5小时，并充分搅拌，滤过，取滤渣用8倍量的80%乙醇加热回流提取1小时，提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入NKA-2大孔吸附树脂柱，先取3BV20%乙醇洗脱杂质，再取5BV75%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇得粗提物，用等倍体积量的乙酸乙酯萃取，连续萃取4次，合并萃取液，萃取液浓缩后上硅胶柱层析（硅胶粒度为100-200目），用环己烷-乙醇按10:1、5:1、1:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集栎瘿酸流分，减压浓缩至小体积，静置析晶，滤出粗晶，再用石油醚-丙酮（1:1）回流溶解，放置结晶，滤出干燥得栎瘿酸，含量93.5%。

 

实施例2：