[发明专利]幽门螺杆菌抗原HLA限制性免疫显性表位肽及应用

说明书

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，涉及筛选和鉴定抗原表位肽的方法，尤其涉及一种幽门螺杆菌抗原HLA限制性免疫显性表位肽及应用。 

背景技术

幽门螺杆菌(Hp)是澳大利亚学者Warren和Marshall在1982年发现的。在过去的近30年时间里，研究证实Hp是胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡的主要病因，并与胃癌，胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)的发生密切相关，被世界卫生组织列为胃癌的I类致癌因子。并且，Hp的感染率非常高，流行病学调查显示全世界有50％的人口携带该细菌，特别是某些发展中国家的感染率甚至高达80％。因此，有效的治疗Hp感染对人类的健康是非常重要的。 

目前，临床上主要采用抗生素多联疗法治疗Hp感染。虽然能够达到85％的根除效率，但是存在以下缺点：1、药物疗法毒副作用大；2、复杂的联合用药导致病人的依从性差；3、药物不能防止Hp的潜在感染；4、抗生素治疗易产生赖药性而导致治疗失败；5、对发展中国家病人而言，药物疗法在经济上也比较困难。免疫接种是预防和控制感染性疾病最经济而有效的方法，鉴于Hp感染的高发病率及其与慢性胃炎、消化性溃疡以及胃癌、胃黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的密切关系，如何通过免疫接种达到防治这些疾病的目的，一直是各国科研人员研究的重点问题。疫苗接种通过有效地调动机体免疫系统，克服细菌对宿主的免疫逃避来达到预防感染和消除已感染的细菌的目的，经济而简便，可在人群中大规模运用，并且对赖药细菌仍然有效，因此研究Hp疫苗具有重要意义。 

动物实验研究表明，疫苗接种可以减少Hp在胃黏膜的定植，并减轻胃黏膜的炎症反应，起到预防和治疗Hp感染的作用。目前关于Hp的疫苗多是采用全菌疫苗或重组亚单位疫苗及核酸疫苗等，其引发的免疫应答与Hp感染是的免疫应答相似。Hp感染使机体内产生强烈的细胞与体液免疫应答，但是感染仍慢性持 续化甚至是终身感染，说明机体已经对Hp的存在免疫耐受，自然感染时产生的免疫应答不能起到保护作用，因而通过疫苗接种的方式清除Hp就必须在抗原选择以及在表位水平对抗原进行改造，激发更有效的免疫应答。表位疫苗是以抗原表位为基础制备的疫苗，是目前感染性疾病，恶性肿瘤以及自身免疫性疾病等疫苗设计的新方向。相对传统疫苗其具有很多的优点：1.选择性提高所选择表位的免疫原性；2.去除表位所在蛋白中不必要甚至有害的部分，降低疫苗使用风险。3.可以对表位进行优势组合，扩大免疫应答的宽度；4.应用广泛，不仅有预防作用，还可以作为治疗性疫苗使用。 

研制表位疫苗的第一步是表位的筛选和鉴定。Hp是一种胞外感染细菌，研究证实，CD4+T淋巴细胞在抗Hp感染免疫应答中起着非常重要的作用，因此，在Hp表位疫苗的设计中加入CD4+T细胞表位(及辅助T细胞表位)尤为重要。此外，并非所有的表位均能诱导机体产生强烈的免疫应答，只有免疫显性表位才能引起机体强烈的免疫应答，亚显性表位引起的免疫应答远远弱于显性表位，因此，免疫显性CD4+T细胞表位才是Hp表位疫苗所需要的。 

目前，已报道的Hp抗原CD4+T细胞表位均为小鼠H-2限制性Th表位，由于小鼠和人MHC分子的差别，H-2限制性表位可能不适用于人类疫苗设计，因此需要筛选鉴定HLA限制性表位。此外，现有报道的Hp表位多采用生物信息学软件预测而来，准确率不高，虽能通过实验加以验证，但是仍不能避免表位漏筛现象。此外，软件预测方法筛选表位难以解决表位的免疫显性问题，而免疫显性表位才是Hp表位疫苗最佳的候选表位。因此，建立一种系统的筛选免疫显性CD4+T细胞表位的方法显得尤为重要。本发明利用抗原特异性T细胞及步移重叠合成肽，建立了一种系统筛选Hp抗原HLA限制性免疫显性辅助T细胞(Th细胞)表位的方法。 

发明内容

本发明的目的是提供一种幽门螺杆菌抗原HLA限制性免疫显性表位肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：8、22、30和42所示。 

所述氨基酸序列如SEQ ID NO：42所示的表位多肽具有HLA-DR限制亚性。 

所述HLA限制性亚型为HLA-DRB1*0406。 

本发明所提供的幽门螺杆菌HpaA抗原的免疫显性表位肽可在制备用于预防或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗中应用。