[发明专利]一种海洋青霉菌菌株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种海洋青霉菌菌株及其应用。

背景技术

海洋青霉是一类广泛存在于海洋的好氧性真菌，长期以来青霉一直用作柠檬酸、延胡索酸、葡萄糖酸、抗生素的工业生产菌。海洋微生物所处的特殊环境，使其很大程度上演变成新的种群或具有新的特殊生理功能的亚种，形成了陆生微生物所不具有的特性。微生物是开发研制抗生素及其他生理活性物质的重要资源。近几年来，深部真菌病发生率有明显的上升趋势。

随着从海洋真菌发现新化合物速率不断增加，人们希望通过对海洋真菌的研究开发，获得更多的新型生物活性物质。在对海洋真菌的分离鉴定中目前沿用了传统的分离鉴定方法，即通过表型特征和细胞形态学的观察，对真菌生理生化反应和细胞组成成分结构进行比较分析来实现分类鉴定。随着生物化学、遗传学以及分子生物学、生物信息学等相关学科的发展，同时，也是海洋真菌分类学自身发展的客观要求，分子生物学鉴定方法被引入海洋真菌的菌种鉴定中，使菌种的鉴定在以形态特征和生理生化特征为基础的鉴定上更加准确、可靠。

真菌的核糖体DNA内转录间隔区ITS(internal transcribed spacer)位于18S和5.8S rDNA(ITS1)以及5.8S和28S rDNA(ITS2)之间，是中度保守区域，长度大约在550～750bp。由于ITS区不加入成熟核糖体，因此在进化过程中承受的自然选择压力非常小，能容忍更多的变异，表现为种内菌株间相对保守，但在种间的差异非常明显，这种特点使其非常适用于对真菌物种的分子鉴定以及属内物种间或种内差异较明显的菌群间的系统发育关系分析，即使是亲缘关系非常接近的两个种都能在ITS序列上表现出差异，显示其最近的进化特征。研究表明，ITS片段的进化速率是18s rDNA的10倍，这就是ITS序列在微生物种类鉴定和群落分析的理论基础。

发明内容

本发明提供了一种海洋青霉菌菌株，具有很好的抑制真菌的作用，尤其对金黄色葡萄球菌具有强烈的抑菌作用，对黑曲霉，白色假丝酵母，大肠杆菌等也具有很好的抑制效果，对于真菌病的治疗具有重要意义。

一种海洋青霉菌菌株，命名为灰黄青霉(Penicillium griseofulvum)zju87，保藏在位于北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所的中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期为2011年5月19日，保藏号为CGMCC No.4888。

所述的灰黄青霉zju87的ITS的碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的灰黄青霉zju87分离自浙江东海海泥，在常温和筛选培养基上生长良好，菌落表面呈灰绿色，反面呈浅黄色，菌落在培养第二天开始产孢子，并在第三天完全成熟。

本发明还提供了上述灰黄青霉zju87在抑制金黄色葡萄球菌生长中的应用。

通过对灰黄青霉zju87进行抑菌试验，发现该菌株对金黄色葡萄球菌(Staphycococcus aureus)具有强烈的抑菌作用，同时还对黑曲霉(Aspergillus niger)，白色假丝酵母(Candida albicans)，大肠杆菌(Escherichia coli)等也具有很好的抑制效果；通过对灰黄青霉zju87的形态观察、培养特征及ITS序列分析，灰黄青霉zju87具备典型的青霉属形态特征，ITS碱基序列与灰黄青霉(Penicillium griseofulvum strain 091402)的同源性为99％。

附图说明

图1是本发明海洋青霉菌菌株的形态学结构特征图；

图2是本发明海洋青霉菌菌株的ITS序列PCR产物的电泳检测图。

(其中M：DL3000 Marker；1：海洋青霉菌菌株的ITS序列)

具体实施方式

筛选/种子培养基(g/L)：葡萄糖10、可溶性淀粉10、蛋白胨2、酵母膏1、FeSO₄ 0.01、海水/蒸馏水(3/2)、pH7.2～7.5；

发酵培养基(g/L)：可溶性淀粉20、黄豆饼粉2、酵母膏1、K₂HPO₄1、FeSO₄ 0.01、MgSO₄ 0.5、海水/蒸馏水(3/2)、pH7.2～7.5；

金黄色葡萄球菌培养基(g/L)：蛋白胨10、牛肉膏3、琼脂粉20、NaCl 5、pH 7.4；