[发明专利]一株饲用凝结芽孢杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物菌株，特别是涉及一株饲用凝结芽孢杆菌菌株及其应用。

背景技术

饲用抗生素滥用所引发的病原菌耐药、抗生素残留等问题，已经引起了全世界的普遍关注。欧美许多国家对饲料中抗生素的使用都有严格的控制，一些发达国家甚至禁止在动物饲料中使用任何抗生素。用微生态制剂替代饲用抗生素逐渐受到饲料行业人士的认可。

目前，常用的饲用微生态制剂主要是由乳酸菌、芽孢杆菌、酵母菌等菌株中的一种或几种制成。一般的乳酸菌，如干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌等抗逆性较差，对高温、胆盐、强碱等比较敏感，在应用和贮藏方面也存在一些困难；芽孢杆菌可形成芽孢，其芽孢抗逆性强，耐高温高压、耐强酸、强碱和胆盐，易于加工和贮藏。凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)又称乳酸芽孢杆菌，既能产生乳酸、又能形成芽孢，是一种具有很大应用潜力的菌株。

目前，凝结芽孢杆菌产品在动物饲料中的研究和应用还处于初级阶段，专利CN1831113A公开了一株用于水质净化的凝结芽孢杆菌，但未研究该菌对病原菌是否有抑制作用；专利CN101390571A中公开了一种凝结芽孢杆菌饲料添加剂及其制备方法，其菌株保藏号为AS1.2407，与本发明的菌株为不同亚种的凝结芽孢杆菌。

发明内容

本发明的目的是提供一株对致病菌具有抑制作用的饲用凝结芽孢杆菌。

本发明所提供的凝结芽孢杆菌菌株(Bacillus coagulans)的名称为F5，该菌株已于2011年05月16日保藏于地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.4846。

凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846是革兰氏阳性杆菌，端生芽孢；在YPD培养基上生长良好，48h形成直径2～3mm大小的圆形菌落，菌落呈白色有光泽，表面湿润、平坦，边缘整齐；兼性厌氧或需氧生长，生长温度范围：20℃～90℃，最适生长温度：37℃～55℃；生长酸碱度范围：pH 2～9，最适pH值为7.0；部分生化特性如表1所示：

表1凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846的部分生化特性

注：“+”表示反应阳性；“-”表示反应阴性。

体外拮抗试验结果表明：凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846对大肠杆菌(Escherichia coli O139、E.coli K88、E.coli K99)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium O4Hi，ST O4Hi)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等均有很强的抑制作用。

凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846可耐受pH 1.5～2.5合成胃液180min；最高耐受胆盐浓度为3.0％(质量百分比浓度)。

磺胺类和杆菌肽类抗生素对凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846的抑制作用较弱，青霉素类、先锋霉素类、氨基糖苷类和四环素类抗生素对凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846的抑制作用明显。

急性毒性试验结果表明小鼠对凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846的最大耐受剂量MTD＞15000mg/kg，根据分级标准，该菌株为无毒物质。

本发明的第二个目的是提供一种凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846菌剂。

本发明所提供的菌剂，其活性成分为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846。

所述凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)F5 CGMCC No.4846菌剂的制备方法，可包括以下步骤：

1)配制液体培养基(DS培养基)：葡萄糖20g/L，氯化钠5g/L，酵母粉5g/L，大豆蛋白胨10g/L，胰蛋白胨10g/L，牛肉膏5g/L，磷酸二氢钾5g/L，硫酸镁1g/L，硫酸锰1g/L，碳酸钙1g/L，碳酸钠1g/L，调节初始pH 7.0；