[发明专利]桑白皮药材或桑白皮提取物的总生物碱类成分指纹图谱的构建方法及其质量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药材的质量检测领域，具体而言，涉及一种对桑白皮药材或桑白皮提取物中总生物碱类成分的指纹图谱构建方法及检测方法。 

背景技术

桑白皮为桑科植物桑Morus alba L.的干燥根皮，始载于《神农本草经》，列为中品，历代本草均有收载。桑白皮性甘、寒，归肺经，具有泻肺平喘、利水消肿功能，主治肺热喘咳、水肿胀满尿少、面目肌肤浮肿。桑白皮的主要化学成分包括：黄酮类化合物、哌啶型生物碱类化合物(以1-脱氧野尻霉素为代表)、香豆素类化合物、多糖类化合物等。桑白皮提取物由桑白皮药材为原料制备而成：首先将桑白皮药材切制或粉碎，用水提取，提取次数为1～3次，优选提取3次，提取温度为室温至煮沸，优选煮沸提取，溶剂量为药材重量的10～30倍重量份，优选20～30倍，获得桑白皮药材水提取液；然后提取液浓缩后离心，上清液过强酸型阳离子交换树脂，树脂可选择001*4、001*7、D61、D001cc等型号，优选001*7(732型)，上柱流出液弃之，收集0.1～1N的氨水洗脱液，优选用0.5N的氨水洗脱，洗脱液浓缩后，最终获得桑白皮提取物，或经过喷雾干燥、减压或常压干燥得到桑白皮提取物。桑白皮药材及其提取物在民间常用于消炎、利尿、解热、镇咳、祛痰等。 

桑白皮所表现出来的多种功效吸引着众多学者的目光，人们对其中的哌啶型生物碱类化合物开始了大量而深入的研究。20世纪70年代，日本学者Yoshiaki首次从桑白皮中分离得到一种生物碱Moranoline(1-脱氧野尻霉素，1-deoxynojirimycin，DNJ)，研究证实它能在小肠竞争性抑制a-葡萄糖苷酶的活性，可用于治疗糖尿病、肥胖症、病毒感染等疾病。随后，国内外学者又从桑白皮中分离出多种生物碱，并确定了其分子结构。研究人员将这些生物碱类化合物作用于糖尿病小鼠模型并充分证明，上述多种生物碱类化合物的降糖效果非常明显。 

在对上述生物碱类活性成分的分离和提取过程中，人们发现由于DNJ及其他衍生物结构中含有较多羟基，属氮杂糖类，结构中没有苯环、双键、羰基等发色基团，在可见光区和紫外光区都没有吸收，故很难用HPLC-UV法直接测定其含量。目前国内外文献报道多采用荧光试剂芴甲氧酰氯(FMOC-Cl)与DNJ发生柱前衍生化反应后，用HPLC-FLU法进行测定。FMOC-Cl是一种氨基酸衍生化试剂，主要用于伯胺和仲胺的衍生化，生成的衍生物具有稳定的荧光强度。DNJ分子中因为具有仲胺结构，所以可用FMOC-Cl进行柱前衍生化，生成的衍生物采用HPLC-FLU法进行测定。采用此方法对桑白皮药材或桑白皮提取物进行检测，虽然可以有效地检测出DNJ的含量，但是仅能检测出这一单一成分，无法全面反映并控制桑白皮药材以及桑白 皮提取物中总生物碱类活性成分的含量。 

杨文宇等在题为《桑树总生物碱分析方法与提取方法的探讨》一文中，公开了一种从桑叶、桑椹、桑白皮和桑枝中提取总生物碱的方法。该方法利用氯-邻联甲苯胺试剂作为显色剂，利用薄层色谱分析以及分光光度法检测总生物碱。这种方法虽然比较简便，对仪器的要求不高，但其分辨率较差，总生物碱中所含成分及含量均无法检测出来，并不适合对桑白皮药材以及桑白皮提取物进行精确的质量检测。 

由此可见，为提高桑白皮药材以及桑白皮提取物现有质量标准，亟待建立一种检测精确度较高、可鉴别总生物碱类多种活性成分的检测方法。 

发明内容

为了解决桑白皮药材或桑白皮提取物现有质量检测过程中仅能检测出单一成分，无法全面反映桑白皮总生物碱类活性成分含量的问题，本发明提供了一种桑白皮药材或桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱的构建方法。 

本发明提供的桑白皮药材或桑白皮提取物总生物碱类成分指纹图谱的构建方法包括以下步骤：(a)制备桑白皮药材溶液或桑白皮提取物溶液：以0.02mol/L的盐酸溶液或水作为溶剂，将桑白皮药材的粉末配制成桑白皮药材溶液；或者以水作为溶剂，将桑白皮提取物的粉末配制成桑白皮提取物溶液；