[发明专利]一种检测黄牛FGF21基因单核苷酸多态性的方法

权利要求书

1.一种快速检测黄牛FGF21基因SNP的RFLP方法，其特征在于：以包含FGF21基因的待测黄牛基因组DNA为模板，PCR扩增黄牛FGF21基因，发现4个SNP位点；针对这4个SNP位点分别设计引物对F159、F297、F940、F1151，进行PCR扩增，用限制性内切酶SalI、XhoI、XbaI、MspI分别酶切该PCR扩增产物，再用琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，根据电泳结果鉴定黄牛FGF21基因第159位、第297位、第940位、第1151位的单核苷酸多态性。

2.如权利要求1所述的检测黄牛FGF21基因SNP的RFLP方法，其特征在于，以包含FGF21基因的黄牛基因组DNA为模板，PCR扩增黄牛FGF21基因。将PCR产物送测序，根据突变情况重新设计引物对F159、F297、F940、F1151，依次引入SalI、XhoI、XbaI、MspI酶切位点，PCR扩增黄牛FGF21基因；

所述的引物对F159为：

上游F159-SalI：5′CCGCCAGCGGTACCTCTACACGGTCGA  3′，

下游R159：5′TCCAAGAGACCTGAGGGGAGAAAGTGGG  3′；

所述的引物对F297为：

上游F262-XhoI：5′CCTGAAGCAGTAGGGAATTGGGGCCTCG  3′，

下游R262：5′CACCGATCCGTACAGCTTCCCATCTGGC  3′；

所述的引物对F940为：

上游F940：5′CCTGGCTCATGCTGGGCGAAGGGTC  3′，

下游R940-XbaI：5′CGGAGGCAGGTCCCTCCTTAACCTCTAG  3′；

所述的引物对F1151为：

上游F1151：5′AGACCTAGACGATAAAGCTGAGAAAGGAGG  3′，

下游R1151-MspI：5′AAAGTGCAGCTGCGGGGATGAGAGCC  3′。

用限制性内切酶SalI、XhoI、XbaI、MSpI分别酶切该四对引物的PCR扩增产物，再用琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳结果鉴定黄牛FGF21基因第159位、第297位、第940位和第1151位的单核苷酸多态性。

3.如权利要求1所述的检测黄牛FGF21基因SNP的RFLP方法，其特征在于：所述的琼脂糖凝胶的质量浓度为3.5％。

4.如权利要求1所述的检测黄牛FGF21基因SNP的RFLP方法，其特征在于，第159位的单核苷酸多态性为：TT基因型表现为244bp条带，TC基因型表现为244bp、221bp和23bp条带，CC基因型表现为221bp和23bp条带；第297位的单核苷酸多态性为：CC基因型表现为205bp条带，CG基因型表现为205bp、180bp和25bp条带，GG基因型表现为180bp和25bp；第940位的单核苷酸多态性为：CC基因型表现为207bp条带，CT基因型表现为207bp、179bp和28bp条带，TT基因型表现为179bp和28bp；第1151位的单核苷酸多态性为：CC基因型表现为151bp和27bp条带，CT基因型表现为178bp、151bp和27bp条带，TT基因型表现为178bp。