[发明专利]抗原组合物

说明书

技术领域

本发明主要涉及脂质用于制备抗原组合物的用途，特别是制备活的细菌疫苗的用途，及使用该组合物使动物免疫的方法。

背景技术

大多数人和动物的病原体，包括那些引起肺结核(TB)的病原体，可通过粘膜表面引发感染。因此，对抗这些病原体的保护性免疫可能需要强粘膜免疫反应的诱导。然而，在非肠道免疫后的粘膜免疫反应一般较弱。尽管对保护粘膜位点的疫苗，特别是TB疫苗有着明显的需要，但当前使用的疫苗是通过皮内或皮下注射使用的。因而人们希望开发更有效的组合物，和/或可选择途径的疫苗给药系统。特别是口服疫苗具有许多优点，包括易于服用，并以粘膜免疫反应为目标。尽管如此，能够对动物和人提供粘膜和/或系统免疫的口服疫苗到目前为止大多是无效的。这种疫苗的功效受到在其通过肠道时疫苗退化的影响。特别是大多数抗原化合物具有肽键，其很容易被肠道中的胃酶和蛋白酶分解。

许多疫苗依赖于有机体冻干制剂的使用。例如，目前使用的人TB疫苗以被称为卡介苗(BCG)的活减毒细菌的冻干制剂为基础。然而，已表明冻干过程可导致BCG活性损失30-50％并损害剩余活细菌的恢复(7)。可在使用前使有机体保持较大活性的组合物将极大地提高疫苗的功效。

为改善免疫反应，抗原与许多佐剂混合以刺激免疫原性。这些佐剂主要是明矾和水包油型乳化液。后一类以弗氏(Freund’s)矿物油佐剂为代表。然而，在人和脊椎动物疫苗中使用弗氏完全佐剂(FCA)是不可取的，因为已有毒性反应的报道。基于这些理由，弗氏佐剂可能也不适用于口服。

在其它的水包油型乳化液中因为油含量高，所以需要表面活性剂。表面活性剂的清洁性使它们不适用于肠道或口服使用。另外，甚至对于被批准使用的表面活性剂也有毒性反应的报道。乳化液其它的缺点在于其是一种液体分散于另一种液体中时不能混溶的异质系统，该系统是不稳定的，并且水相随时间发生分离，这对使疫苗保持在稳定的悬浮液中造成困难。此外，防止在油包水型乳化液的水相中截留的抗原免于降解是不可能的。

也研究了脂质体和脂质囊泡在疫苗上的使用，特别是对容易胶囊化的较小抗原成分而言。通常，脂质体和脂质囊泡对于较大抗原如活的微生物的胶囊化是无效的。另外，脂质体和脂质囊泡生产成本高且生产耗时，并且在它们的制备中所用的提取过程可能导致疫苗制剂化学结构或活性改变，因此导致疫苗免疫原性的改变。例如，受热和溶剂可能改变抗原成分如蛋白质的生物学完整性。

因此本发明的目的是提供一种抗原组合物和/或给药系统，其可解决这些需要或至少为公众提供一种有用的选择。

发明概述

因此，在第一个方面本发明提供一种抗原组合物，其包含脂质制剂和至少一种抗原成分，该抗原成分包含活的有机体。

优选地，该脂质制剂是固体形式。

在另一个方面本发明提供一种抗原组合物，其包含在10℃或以上时为固体形式的脂质制剂和至少一种抗原成分。

优选地，在本发明的组合物中使用的脂质制剂包含长链脂肪酸。

在脂肪酸组分方面，优选的脂质制剂包含40％-100％，优选为60％-100％，更优选为80％-100％，再更优选为90％-100％的C₁₆和/或C₁₈脂肪酸。

更优选的组合物含有脂质制剂，该脂质制剂包含少于35％，优选少于25％，更优选少于10％的C₁₄或更短的脂肪酸。

在一种实施方案中，脂质制剂包含：

20％-60％的饱和脂肪酸；

25％-60％的单不饱和脂肪酸；及

0.5％-15％的多不饱和脂肪酸。

在特别优选的组合物中，脂质制剂包含：

35％-50％的饱和脂肪酸；

40％-55％的单不饱和脂肪酸；及

5％-9％的多不饱和脂肪酸。

在本发明中所用的通常优选的脂质制剂具有以下配方：3％的肉豆蔻酸；26％的棕榈酸；15％的硬脂酸；40％的油酸；及6％的亚油酸。

抗原成分可以是蛋白质、糖蛋白质、肽、或者具有蛋白质或肽成分的因子。

在一种实施方案中，抗原成分包含活的有机体。

优选地，本发明组合物中的活的有机体是细菌，特别是非病原性细菌，更优选属于分支杆菌属的细菌。本发明中使用的特别优选的分支杆菌是牛型结核菌(Mycobacterium bovis)BCG。