[发明专利]一种时间分辨荧光免疫层析即时定量检测试剂和方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测领域。具体地，本发明涉及一种时间分辨荧光免疫层析即时定量检测试剂和方法。

背景技术

免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。将抗体分子与一些示踪物质如荧光素结合，抗原抗体反应后，利用荧光显微镜判定结果。该技术的主要特点特异性强，但淬灭率高，不稳定，不易保存。

胶体金免疫层析(GICA)技术是20世纪80年代初在免疫渗滤技术基础上建立的一种简易快速的免疫学检测技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，GICA是以NC膜为载体，利用微孔膜的毛细管作用，使滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，如同层析一般。免疫金复合物干片粘连在近NC膜条下端，膜条测试区包有特异抗体，当试纸条下端进入液体标本样中，下端吸水材料吸取液体向上端移动，流经近NC膜条下端时，使干片上的免疫金复合物复溶，并带动其向膜条渗移，若标本有特异性抗原时，可与免疫金复合物的抗体结合，形成的金标抗原-抗体复合物流至测试区，被固相抗体所捕获，形成抗体-抗原-金标抗体复合物，在膜上测试区出现红色控制线。

胶体金免疫层析技术已经用于检测血清、血浆、全血、组织液、尿液、唾液中的特定蛋白质，特异性强、简便快速，但由于样本中荧光物质和背景的干扰，易出现假阳性，直接影响检测结果的准确性。

因此，本领域需要开发快速、准确、高效、简便地抗原检测方法及试剂。

发明内容

本发明的目的就是提供一种检测样本中特定的蛋白质成分的试剂和方法，快速、高效、简便、准确。

在本发明的第一方面，提供了一种乳胶微粒，所述乳胶微粒内部含镧系元素，外表面覆有凝胶层。

在另一优选例中，所述凝胶层为氨基葡萄糖凝胶层。

在另一优选例中，所述氨基葡萄糖的分子量为10,000-2,000,000，较佳地为50,000-800,000。

在另一优选例中，所述镧系元素包括钐、铕、铽、或其螯合物。

在另一优选例中，所述乳胶微粒的直径为100-300nm。

在另一优选例中，所述乳胶微粒的直径为150-200nm。

在本发明的第二方面，提供了一种抗体复合物，所述复合物包括第一方面所述的乳胶微粒以及偶联于所述乳胶微粒的抗体。

较佳地，所述抗体通过共价方式偶联于所述乳胶微粒。更佳地，所述抗体通过活化的羟基或羧基共价偶联于所述乳胶微粒。

在另一优选例中，所述抗体与所述乳胶微粒的重量比例为1∶2～1∶50，较佳地为1∶5～1∶25。

在另一优选例中，所述的抗体与所述乳胶微粒的重量比例为1∶8～12。

在本发明的第三方面，提供了一种免疫层析测试条，所述测试条含有第二方面所述的抗体复合物或本发明第一方面所述的乳胶微粒。

根据本发明，所述测试条包括以下组件：样品垫、结合物释放垫、检测线、反应膜、对照线、吸收垫、和背衬。

在本发明的第四方面，提供了一种试剂盒，其特征在于，包括：

(a)本发明的第三方面所述的测试条；和

(b)使用说明书。

在另一优选例中，所述测试条密封于一容器或包装中。

在本发明的第五方面，提供第二方面所述的抗体复合物或第三方面所述的测试条的用途，用于制备检测全血、血浆、血清、尿液、或唾液的试剂盒。

在本发明的第六方面，提供一种检测特定抗原的方法，包括步骤：

用本发明第三方面所述的测试条或第四方面所述的试剂盒进行时间分辨免疫层析检测。

本发明的乳胶微粒、抗体复合物和试剂盒，可大幅度消除非特异性的结合，使检测信号的信噪比显著提高，且乳胶微粒通过凝胶包裹，稳定性得到改善。本发明的检测方法具有快速、高灵敏度、高特异性等优点。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1为Eu³⁺的荧光光谱曲线图。

图2为时间分辨荧光测量的原理示意图。

图3显示了本发明一种侧流免疫层析试纸条(板)的结构示意图，