[发明专利]细菌产的抗氧化剂及其药物组合物

权利要求书

1.制备细菌产的抗氧化剂的方法，该方法包括以下步骤：

1)将1～2环青霉JTLR-1接种于PDA固体培养基，在28℃下培养2天，然后转接于装有200mL察氏培养基的500mL三角瓶中，在28℃、180r/min条件下摇瓶培养7天，收集液体发酵培养物；

2)液体发酵培养物过滤后取固形菌丝，然后用液氮反复冻融并研碎后，加入蒸馏水形成过40目标准筛的流体，再用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后取水层加入萃取溶剂进行萃取，萃取三次，合并三次萃取液，然后加入无水Na₂SO₄除水，过滤去除固形物后得到提取液，再在35～40℃下减压除去溶剂，得到无水提取物；

3)取1g无水提取物溶解于60～70mL乙酸乙酯，得无水提取物乙酸乙酯溶液，然后上样于硅胶填料，上样流速为5～6mL/min，弃去流经硅胶填料的乙酸乙酯溶液；

4)按体积比20∶100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，然后洗脱硅胶，洗脱流速为2.5～5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，弃去洗脱液；

5)按体积比60∶100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，继续洗脱硅胶，洗脱流速为2.5～5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，收集洗脱液，在45～50℃下减压除去溶剂，得到具有抗氧化作用的提取物；

其中，步骤2中蒸馏水的加入量为每1g研碎后物质加10-12mL蒸馏水，步骤2中水层与萃取溶液的体积比为1∶1.5，步骤3中上样的量按无水提取物质量计，无水提取物与硅胶的质量比为1∶35～40，硅胶的粒径为20μm～50μm。

2.一种抗氧化剂，其是通过包括以下步骤的方法制备的：

1)将1～2环青霉JTLR-1接种于PDA固体培养基，在28℃下培养2天，然后转接于装有200mL察氏培养基的500mL三角瓶中，在28℃、180r/min条件下摇瓶培养7天，收集液体发酵培养物；

2)液体发酵培养物过滤后取固形菌丝，然后用液氮反复冻融并研碎后，加入蒸馏水形成过40目标准筛的流体，再用正己烷萃取，直至正己烷萃取液无色后取水层加入萃取溶剂进行萃取，萃取三次，合并三次萃取液，然后加入无水Na₂SO₄除水，过滤去除固形物后得到提取液，再在35～40℃下减压除去溶剂，得到无水提取物；

3)取1g无水提取物溶解于60～70mL乙酸乙酯，得无水提取物乙酸乙酯溶液，然后上样于硅胶填料，上样流速为5～6mL/min，弃去流经硅胶填料的乙酸乙酯溶液；

4)按体积比20∶100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，然后洗脱硅胶，洗脱流速为2.5～5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，弃去洗脱液；

5)按体积比60∶100将乙酸乙酯溶液和无水乙醇混合，继续洗脱硅胶，洗脱流速为2.5～5mL/min，洗脱体积为硅胶体积的15倍，收集洗脱液，在45～50℃下减压除去溶剂，得到具有抗氧化作用的提取物；

其中，步骤2中蒸馏水的加入量为每1g研碎后物质加10-12mL蒸馏水，步骤2中水层与萃取溶液的体积比为1∶1.5，步骤3中上样的量按无水提取物质量计，无水提取物与硅胶的质量比为1∶35～40，硅胶的粒径为20μm～50μm。

3.一种药物组合物，其中包含权利要求2所述菌产抗氧化剂、表面活性剂、助表面活性剂、促过饱和物质和油。

4.根据权利要求3的药物组合物，其中所述的菌产抗氧化剂重量占该药物组合物重量的10％～30％。

5.根据权利要求3的药物组合物，其中所述的表面活性剂重量占该药物组合物重量的15％～35％。

6.根据权利要求3的药物组合物，其中所述的助表面活性剂重量占该药物组合物重量的10％～35％。

7.根据权利要求3的药物组合物，其中所述的促过饱和物质重量占该药物组合物重量的1％～10％。

8.根据权利要求3的药物组合物，其中所述的油的量是加至该组合物重量的100％。

9.根据权利要求3的药物组合物，其中以该药物组合物的重量计，其中菌产抗氧化剂的含量为15％～25％，表面活性剂的含量为20％～30％，助表面活性剂的含量为15％～30％，促过饱和物质的含量为1.5％～3％，以及加至100％量的油。

10.根据权利要求3的药物组合物，其中所述的油是含8～18个碳原子的中和/或长链脂肪酸甘油酯。