[发明专利]一种甲基营养芽孢杆菌及其发酵生产γ-聚谷氨酸的方法

权利要求书

1.一株非谷氨酸依赖型产γ-聚谷氨酸的菌株，分类命名为甲基营养芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）SK19.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2011201。

2.用权利要求1所述甲基营养芽孢杆菌SK19.001发酵产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于出发菌株为甲基营养芽孢杆菌SK19.001，即CCTCC NO：M 2011201；利用该菌株生产γ-聚谷氨酸的方法为：对γ-聚谷氨酸产生菌甲基营养芽孢杆菌SK 19.001进行斜面、种子、发酵三级培养：

斜面培养：培养基以g／L计：蛋白胨5～8，牛肉膏5～8，氯化钠2～3，琼脂20～25，用蒸馏水定容，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20 min，培养条件为：培养温度35～37℃，培养时间12～14小时；

种子培养：培养基以g／L计：葡萄糖15～20，酵母膏20～15， MgSO₄·7H₂O 0.4～0.6，K₂HPO₄ 0.5～1.5，用蒸馏水定容，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20 min，培养条件为：250 mL三角瓶装液30mL，摇瓶转速200 rpm, 培养温度35～37℃，培养时间8～12小时；

发酵培养：培养基以g／L计：碳源10～100，氮源10～60， MgSO₄·7H₂O 0.4～1，K₂HPO₄ 0.5～1.5，MnSO₄：0.5～1.5mM，用蒸馏水定容，pH 7.0～7.2，121℃灭菌20 min，接种量为1%～10%，培养条件为：250mL三角瓶装液30mL，搅拌转速200 rpm，培养温度35～40℃，培养时间12～24小时；

将制得的发酵液经离心去除菌体，制得发酵液上清液，加入2～4倍体积的无水乙醇、甲醇或丙酮沉淀聚谷氨酸，轻微搅拌后4℃静置过夜，将聚谷氨酸沉淀以少量上述有机溶剂洗涤，用少量去离子水溶解，经透析除去盐、糖小分子，最后冷冻干燥，得到γ-聚谷氨酸。

3.根据权利要求2所述的发酵产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于发酵培养基中碳源选用葡萄糖、甘油、蔗糖、麦芽糖、甘露糖，柠檬酸或谷氨酸。

4.根据权利要求2所述的发酵产γ-聚谷氨酸的方法，其特征在于发酵培养基中氮源选用有机氮源蛋白胨、酵母膏或玉米浆，或选用无机氮源NH₄Cl或(NH₄)₂SO₄；上述氮源单独使用，或混合使用。