[发明专利]桑色素-7-硫酸酯钠抑制PRL-3酶活性及在抗肿瘤转移药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于一种桑色素-7-硫酸酯钠抑制PRL-3酶活性及在抗肿瘤转移药物中的应用。

背景技术

促肝细胞再生磷酸酶-3(phosphatase of regenerating liver-3，PRL-3)为小分子蛋白酪氨酸磷酸酶，新近发现其与肿瘤转移密切相关。

目前PRL-3与肿瘤转移的关系已经十分明确。PRL-3基因最初被发现在人结直肠黏膜上皮细胞和结直肠原发癌细胞中低表达，而在淋巴结、肺和肝等转移灶中持续高表达，提示PRL-3基因与结直肠癌的转移密切相关，其后众多研究还表明PRL-3高表达与人胃癌、食管癌、鼻咽癌、SKNAS成神经细胞瘤、乳腺癌和黑色素瘤转移有关，且PRL-3高表达的癌症患者预后情况远差于PRL-3低表达患者。另外体内和体外实验也表明高表达PRL-3与肿瘤转移生物学行为相关。

同时国内外对PRL-3相互作用蛋白和PRL-3在肿瘤转移中的信号转导途径已进行了较深入的研究。Peng L等通过酵母双杂交系统发现PRL-3能与整合素结合并通过ERK1/2和MMP-2信号途径促进结肠癌的侵袭转移能力，Ming J等研究报道PRL-3能通过上调ERK磷酸化水平并激活Rho-A/C活性促进肺癌细胞的血管生成和转移能力；Wang L报道姜黄素能通过抑制Src磷酸化而下调PRL-3的表达，从而抑制黑色素瘤细胞的转移相关能力。因此Zeng Q等提出：PRL-3在筛选抗肿瘤转移药物方面是一个具有吸引力的分子靶点，其抑制剂研究具有巨大的临床应用价值。

韩国学者Ahn JH通过化学合成方法得到多种罗丹宁衍生物，发现2个具有一定抑制作用的PRL-3抑制剂。Moon MK从红藤仔草中分离得到的2-甲基-1，3，6-三羟基-8，9蒽醌对PRL-3酶也具有较好的抑制作用，IC₅₀为1.3μg/ml。我们对桑色素进行结构改造，分离得到了水溶性的桑色素-7-硫酸酯钠，对PRL-3酶具有很好的抑制作用，IC₅₀值达到0.94μmol/L，并抑制肿瘤细胞体外侵袭和运动能力。

经检索发现，目前暂无桑色素-7-硫酸酯钠抑制PRL-3酶活性及抑制肿瘤细胞体外转移相关能力的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种桑色素-7-硫酸酯钠抑制PRL-3酶活性及在抗肿瘤转移药物中的应用，本发明应用基因工程技术得到具有酶活性的人PRL-3蛋白，通过PRL-3酶抑制剂筛选模型，筛选得到一种半合成的桑色素-7-硫酸酯钠对PRL-3酶活性的具有明显的抑制作用，IC50值为0.94μmol/L，抑制效果大大强于其母体桑色素，也优于国外研究报道的其它化合物或天然产物，同时Transwell小室法测定结果表明桑色素-7-硫酸酯钠也能抑制肿瘤细胞的体外侵袭和运动能力，Western blot和荧光定量PCR结果显示桑色素-7-硫酸酯钠能特异性抑制PRL-3蛋白和mRNA表达，而不抑制PRL-3同家族成员PRL-1和PRL-2蛋白和mRNA的表达。

为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案是：通过基因工程技术得到具有酶活性的人PRL-3蛋白，通过测定PRL-3酶水解底物DiFMUP中磷酸基团生成DiFMU的荧光强度，计算桑色素-7-硫酸酯钠对PRL-3酶活性的抑制作用，并采用半数效量概率单位法计算其IC50值，然后通过Transwell小室法测定桑色素-7-硫酸酯钠抑制肿瘤细胞的体外转移能力，Western blot和荧光定量PCR分析桑色素-7-硫酸酯钠对PRL-3表达的影响，可应用于制备PRL-3酶抑制剂的阳性对照试剂或化合物，以及在药物中，作为其中一个组分或前体用于制备抗肿瘤转移药物。

具体实施方式

实施例1