[发明专利]一种产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法

权利要求书

1.一种产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）同步培养

将根霉菌的原始菌株和其高产突变株在同样的培养条件下进行同步培养发酵富马酸，并每12～16 h对发酵液进行取样；

（2）根霉菌胞内代谢物的提取

将取样得到的发酵液中的根霉菌细胞用冷甲醇溶液灭活，并将淬灭后的根霉菌细胞在液氮中捣碎；将甲醇、氯仿、水的预冷溶液加入到细胞粉末中，同时，加入核糖醇作为内标物，振荡混均；

（3）GC-TOF-MS测定和胞内代谢物分析

将步骤（2）得到的样品分别加入甲氧基铵盐酸盐的吡啶溶液和三甲基硅烷基三氟乙酰后，用GC-TOF-MS分析，定性定量检测出根霉菌细胞内所有代谢物；

（4）多元统计分析

利用主成分分析法对步骤（3）确定的胞内代谢物进行分析，确定生物标记物和显著变化因素；

（5）高产富马酸根霉菌突变株的机理分析

将步骤（4）分析得到的生物标记物和显著变化因素结合根霉菌的代谢功能区进行比对，分析高产富马酸突变株细胞内的代谢特征，从代谢水平理解突变株高产富马酸的机理；

（6）根霉菌生物合成富马酸的发酵调控

结合根霉菌高产突变菌株的胞内代谢特征，改变发酵过程参数，以实现调控根霉菌生物合成富马酸的发酵过程。

2. 根据权利要求1所述的产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法，其特征在于所述的根霉菌包括米根霉或者少根根霉。

3. 根据权利要求1所述的产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法，其特征在于步骤（5）所述的包括中心碳代谢功能区比对。

4. 根据权利要求3所述的产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法，其特征在于所述的中心碳代谢功能区比对包括糖代谢、氮代谢、嘌呤嘧啶代谢以及脂肪酸代谢等代谢功能区比对。

5. 根据权利要求1所述的产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法，其特征在于步骤（6）所述的发酵过程参数包括：溶氧、pH、转速、培养基成分、培养方式或者外源添加辅助因子。

6. 根据权利要求5所述的产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法，其特征在于所述的培养基成分包括碳源、氮源或者无机盐。

7. 根据权利要求5所述的产富马酸根霉菌的发酵过程调控方法，其特征在于所述的培养方式包括分步发酵、连续发酵或者补料发酵。