[发明专利]一种油脂中黄曲霉毒素B1快速检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种油脂中黄曲霉毒素B₁快速检测试剂盒及其制备方法，利用吐温20对油脂样品进行乳化处理，再将处理后样品用于黄曲霉毒素B₁胶体金免疫层析检测试纸条检测，属于免疫学和微生物菌类毒性代谢产物检测方法技术领域。

背景技术

黄曲霉毒素(AFT)是一类结构和理化性质相似的二呋喃香豆素衍生物，基本结构含有一个二呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素)，前者是产毒和致癌的主要结构，后者对毒性和致癌性起加强作用。目前已发现的黄曲霉毒素有20种左右，AFT在紫外线下能产生特定的荧光，根据荧光颜色不同，将其分为蓝紫色荧光的B族和黄绿色荧光的G族两大类及其衍生物，其中黄曲霉毒素B₁(AFB₁)的急性毒性最强，是目前已经发现的AFT中的最强致癌物。AFB₁中毒症状表现为呕吐、厌食、发热、黄疸、腹水等肝炎症状，能诱导畸形、癌症的发生，对鱼类、禽类、家畜和灵长类动物的试验证明其肿瘤诱导作用极大，并能诱导多种癌症的发生。大量的流行病学调查证实，AFB₁的高摄入量和人类肝癌的发病率呈正相关关系，例如在非洲和东南亚等一些地区，AFB₁污染饮食被确定是肝细胞癌最主要的诱发因素之一，因此对食品中AFB₁进行快速、有效的检测在食品安全上具有重要意义。

AFT的分子量在312-346之间，熔点为268-269℃。AFB₁分子量为312.27，在中性水溶液中较稳定，在强酸性溶液中稍有分解，易被碱或强氧化剂破坏，加热至268-269℃的熔解温度才开始裂解，故一般烹调温度不破坏其毒性。AFB₁和其它AFT一样，难溶于水、己烷、石油醚，易溶于甲醇、乙醇、氯仿、二甲基甲酰胺等有机溶剂，而花生等含油脂较高的粮食作物相对于其它食物而言更容易受到产AFB₁的霉菌污染，因此被AFB₁污染的食用油对人类健康危害极大。

目前，金标-AFB₁快速免疫层析检测试纸是一种被大量应用的AFB₁检测手段。此种试纸利用胶体金颗粒对黄曲霉素-牛血清白蛋白偶联物(AFB₁-BSA)进行标记，使其与样品中的AFB₁竞争结合固定在试纸条检测线上的抗体，检测线如果显现胶体金的红色，则说明样品中不含有AFB₁，反之则有。此试纸操作简单，灵敏度高，但是由于抗原抗体反应无法在油脂中发生，故此试纸目前无法检测含油脂的液体样品，在检测前必须对油脂样品进行复杂萃取处理和除油步骤，本项发明提供了一种简单处理油脂的液体，该液体与油脂混合后，可将混合液直接作为免疫层析检测试纸(稍加改造)的点样样品并进行快速鉴定。

发明内容

本发明的目的：本发明提供一种简单、有效的油脂样品处理液，并对胶体金标免疫层析检测试纸结构稍加改造后，使其适用于这种油脂混合样品的检测。

本发明技术方案：油脂样品处理原理是采用吐温20作为乳化剂对油脂样品进行乳化处理，使油脂在油脂处理液(甲醇-PBS-吐温溶液)中均匀分散为微小油滴，形成稳定的水包油(O/W)型乳化体系。在层析过程由于吐温20发挥着表面活性剂的作用，微小的油滴完全被水分子稳固包囊着，使作为亲水胶体的抗体始终处于稳定的水相环境中，抗体的活性与功能不会受到影响，并且油样中的AFB₁溶解于甲醇水溶液中可与AFB₁-BSA在水相中竞争结合固定的抗AFB₁抗体，纤维素膜上的免疫反应正常发生而不受微小油滴干扰。

检测原理：分别将AFB₁-BSA与羊抗鼠抗体固定在硝酸纤维素膜上作为检测线与质控线，在层析过程中，处理后的油脂样品中的AFB₁首先与胶体金标记的小鼠抗AFB₁抗体反应，在样品中AFB₁浓度越大，结合在固定抗体上的金标-AFB₁-BSA就越少，检测线所显现的胶体金的红色就越浅。如果油样中AFB₁浓度超过检测限度则所有的胶体金标记的小鼠抗AFB₁毒素抗体都将被结合，则在检测线上就不会出现显色。正常情况下，无论是否含有AFB₁质控线都显示红色。通过观察检测线的颜色可直接定性判断油脂样品中AFB₁的有无。