[发明专利]一种生产高活性和高纯度利福霉素SV的方法

权利要求书

1.一种生产利福霉素SV或利福霉素S的菌株，其特征在于，所述菌株中的细胞色素P450基因和/或转酮酶基因失活或其所编码的酶失活，条件是所述菌株不是保藏号为CGMCC 4.5720的地中海拟无枝菌酸菌。

2.如权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述细胞色素P450基因和/或转酮酶基因选自下组：

(i)具有SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：23和/或SEQ ID NO：24所示序列的核苷酸序列；

(ii)与(i)中序列同源的序列；

(iii)在严格条件下与(i)或(ii)限定的序列杂交、且编码细胞色素P450或转酮酶的序列；和/或

(iv)核苷酸序列与(i)或(ii)有85％以上序列相同性、且编码细胞色素P450或转酮酶的序列。

3.如权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株是天然的菌株或是经遗传工程改造的菌株。

4.如权利要求1所述的菌株，其特征在于，所述菌株是产利福霉素的地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)或由产利福霉素的地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)经遗传工程改造而得。

5.如权利要求3所述的菌株，其特征在于，所述遗传工程改造通过选自下组的方法进行：基因敲除、基因置换、基因沉默、RNA干扰或点突变。

6.一种获得生产利福霉素SV或利福霉素S的菌株的方法，所述方法包括步骤：

(a)提供生产利福霉素的菌株；

(b)使得所述菌株中的细胞色素P450基因和/或转酮酶基因失活或其所编码的酶失活。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述失活是通过选自下组的遗传工程改造实现的：基因敲除、基因置换、基因沉默、RNA干扰、点突变。

8.一种筛选生产利福霉素SV或利福霉素S的菌株的方法，所述方法包括：

(a′)提供生产利福霉素的菌株；

(b′)对所述菌株的细胞色素P450基因和/或转酮酶基因进行检测，或对其所编码的酶的活性进行测定，

如果所述菌株中没有细胞色素P450基因和/或转酮酶基因或其所编码的酶的活性，或该活性显著低于生产利福霉素B的阳性对照菌株，则表明该菌株可用于生产利福霉素SV。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述基因的检测是通过选自下组的方法测定的：PCR测序或Southern杂交。

10.一种生产利福霉素SV、利福霉素S或以其衍生物的方法，所述方法包括：

A)提供权利要求1-5中任一项所述的菌株、用权利要求6-7中任一项所述的方法产生的菌株、或用权利要求8-9中任一项所述的方法筛选得到的菌株；

B)用所述菌株生产利福霉素SV或利福霉素S；以及

C)任选地，用步骤B)所得的利福霉素SV或利福霉素S进一步生产选自下组的利福霉素衍生物：利福布汀、利福喷汀或利福平。

11.细胞色素P450基因或转酮酶基因或它们所编码的蛋白的用途，其用于调控利福霉素SV转化为利福霉素B。

12.如权利要求11所述的用途，其特征在于，所述的细胞色素P450或转酮酶基因或它们所编码的蛋白来源于地中海拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis mediterranei)。

13.如权利要求11所述的用途，其特征在于，所述的细胞色素P450基因或转酮酶基因或它们所编码的蛋白来自产利福霉素B的菌株。

14.如权利要求11所述的用途，其特征在于，所述的细胞色素P450或转酮酶基因或它们所编码的蛋白是单独应用或组合应用的。