[发明专利]一种检测肌酐的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验测定技术领域，具体的说是涉及一种检测肌酐的试剂盒。

背景技术

肌酐(creatinine，Cr)是肌肉在人体内代谢的产物，每20g肌肉代谢可产生1mg肌酐。血中肌酐来自外源性和内源性两种，外源性肌酐是肉类食物在体内代谢后的产物；内源性肌酐是体内肌肉组织代谢的产物。在肉类食物摄入量稳定时，身体的肌肉代谢又没有大的变化，肌酐的生成就会比较恒定。

在肌肉中，肌酸主要通过不可逆的非酶脱水反应缓缓地形成肌酐，再释放到血液中，随尿排泄。因此血肌酐与体内肌肉总量关系密切，不易受饮食影响。肌酐是小分子物质，通过肾小球滤过排出体外。在肾小管内很少吸收，每日体内产生的肌酐，几乎全部随尿排出，一般不受尿量影响。肾功能不全时，肾小球过滤降低，造成血清肌酐水平增加在体内蓄积成为对人体有害的毒素。血浆肌酐的正常上限值为100μmol/L左右。

肾单位时间内，把若干毫升血浆中的内生肌酐全部清除出去，称为内生肌酐清除率(Ccr)。临床上检测血肌酐，计算内生肌酐清除率，可反映肾小球滤过功能和粗略估计有效肾单位的数量，因其操作方法简便，干扰因素较少，敏感性较高，为目前临床常用的较好的肾功能试验之一。

血清肌酐含量的测定方法有很多，现有技术中主要有酶比色法和Jaffe氏苦味酸测定法。

酶比色法的反应原理是以肌酐作为底物，经肌酐脱氨酶催化脱氨生成甲基乙内酰脲，氨与α-酮戊二酸和NADH在谷氨酸脱氢酶的作用生成谷氨酸，NAD和水，在340nm波长下测定NADH的吸光度变化率，计算其含量。虽然酶比色法广泛应用于肌酐测定，但是酶比色法试剂稳定性不好，检测结果重复性差，且价格昂贵。

Jaffe氏苦味酸法的反应原理是样品中的肌酐在碱性环境与苦味酸(2，4，6-三硝基苯酚)反应生成橙红色的复合物，将反应液置于紫外/可见光分析仪下或半、全自动生化分析仪下，检测在主波长510nm处吸光度上升的速度，通过吸光度变化值，测算样品中肌酐的活性。然而现有的Jaffe氏苦味酸法试剂稳定性不好，2，4，6-三硝基苯酚与碱性缓冲溶液混合后24h内就明显变红，致使检测结果偏高，检测准确性降低。

发明内容

有鉴于此，本发明目的是针对现有检测肌酐的试剂盒中2，4，6-三硝基苯酚与碱性缓冲溶液混合稳定性差的问题，提供了一种稳定性好的检测肌酐的试剂盒。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种检测肌酐的试剂盒，包括2，4，6-三硝基苯酚、pH12.5～13.5的缓冲溶液和曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物。

2，4，6-三硝基苯酚，又名苦味酸，英文名为2，4，6-Trinitrophenol、Picric acid，为淡黄色结晶固体，具有苦杏仁味，分子式为C₆H₃N₃O₇，分子量为229.11。现有的Jaffe氏苦味酸法试剂稳定性差，2，4，6-三硝基苯酚与碱性缓冲溶液混合后24h内就明显变红。本发明人发现曲拉通X-100与二甲基亚砜的混合物可包围2，4，6-三硝基苯酚的分子，在pH12.5～13.5的缓冲体系中，可以减缓2，4，6-三硝基苯酚与NaOH的迅速接触，提高试剂的稳定性，保证肌酐检测结果的准确性。

优选的，本发明所述试剂盒中，所述曲拉通X-100与二甲基亚砜体积比为1∶50～1∶100。

优选的，本发明所述试剂盒中，所述二甲基亚砜的加入量为1～20v/v％。试验表明，随着二甲基亚砜加入量的增多，空白吸光度的变化越小，当二甲基亚砜加入量超过10v/v％后，即加入量为10～20v/v％时空白吸光度基本不再变化。因此，本发明所述试剂盒中，所述二甲基亚砜的加入量优选为9.5～10.5v/v％，以降低成本，更优选为10v/v％。

由于肌酐与2，4，6-三硝基苯酚在碱性环境下反应才能生成橙红色的复合物，因此为了保证待测样品中的肌酐能与2，4，6-三硝基苯酚反应，本发明所述试剂盒还包括pH12.5～13.5的缓冲溶液。作为优选，本发明所述pH12.5～13.5的缓冲溶液为Tris、碳酸钠、碳酸氢钠和氢氧化钠的混合溶液。Tris、碳酸钠和碳酸氢钠可以形成缓冲体系，氢氧化钠可以保证缓冲体系为碱性。