[发明专利]复合生物活性肽的制备方法

说明书

 

技术领域：

本发明涉及生物技术中活性肽的制备，具体是一种利用蚯蚓自身蛋白酶降解大豆豆粕以制取含有大豆活性肽、蚯蚓肽的复合生物活性肽的制备方法。

背景技术：

生物活性肽是一类存在于天然动、植物和微生物等生物体内或动、植物蛋白质经蛋白酶酶解而得，具有特殊生理活性的二肽、低分子肽或多肽类物质的总称。活性肽具有多种机体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，食用安全性极高，是当前国际食品、饲料界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。

目前，主要是通过酶解法以动、植物蛋白为底物来生产生物活性肽。不同蛋白酶对蛋白质水解方式不同，获取活性肽数量与活性有较大不同，因此酶的选择是生产活性肽的关键。目前商业用酶主要是微生物酶（酸性蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶及复合酶）、植物蛋白酶及少量的动物蛋白酶，如胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、细菌蛋白酶和霉菌蛋白酶等。生产上制备活性肽时，往往选用一至两种商品酶来水解蛋白， 虽然可以获得纯度较高的活性肽，但是也存在一些不足：其一，选用一两种商品酶水解得到的活性肽结构单一，生物功能简单；其二，商品酶价格昂贵，用量大，且水解度不高，肽得率较低，提高了生产成本，降低了生产效率；其三，商品酶如果选用不对，还会使所得活性肽带有明显的苦味，在某种程度上限制了活性肽的应用。

发明内容：

本发明旨在解决现有生物活性肽制备工艺存在的上述问题，而提供一种以豆粕和蚯蚓为原材料，制备含有大豆肽和蚯蚓肽的复合生物活性肽的制备方法。

本发明解决该技术问题采用的技术方案是：

一种复合生物活性肽的制备方法，包括大豆蛋白提取工序、蚯蚓酶液提取工序，还包括按下述步骤进行的复合生物活性肽制备工序：

a．取大豆分离蛋白加入适量蒸馏水配成0.5～25%的大豆蛋白溶液；

b．取配置好的大豆蛋白溶液1～500ml于酶反应器中，然后在40～100℃下热处理10min, 冷却至30～75℃后用1mol·l^-1NaOH溶液调节pH值至4.0～11.0;

c．加入蚯蚓酶液10～500ml，再加入蒸馏水10～800ml，确保反应液总体积为50～1000ml，慢慢搅拌，进行水解,反应过程中及时加入1mol·l^-1NaOH溶液使系统pH值稳定在2.0～10.0，酶解温度保持在30～90℃；

d．水解反应0.5～12h后,将酶解液迅速加热至90℃,保持10 min灭酶,冷却,再以3000～20000 r·min^-1离心5～15min，取上清液，冷冻干燥或喷雾干燥,得到含有大豆肽和蚯蚓肽的复合生物活性肽粉末，其水解度为38%，肽得率为62%。

作为本发明的一种优选方案，所述大豆蛋白提取工序按如下方法进行：

将豆粕粉碎后置于容器中，按固液比1：1～1：12加入蒸馏水，30～70℃恒温水浴，边搅拌边加入1mol·l^-1NaOH溶液调节pH值至 3～10 之间，继续充分搅拌5～120min，静置30min；500～10000 r·min^-1离心5～60 min，收集上清液, 向上清液中逐滴加入1mol·l^-1盐酸溶液,边加盐酸边搅拌，调 pH 值至 2～10时, 30～80℃恒温水浴，静置 10～60 min，再以500～10000 r·min^-1离心5～30 min, 收集沉淀, 喷雾干燥或者冷冻干燥备用，用微量凯氏定氮法测定分离蛋白粉末的蛋白质含量。

作为本发明的一种优选方案，所述蚯蚓酶液提取工序按如下方法进行：

将新鲜蚯蚓洗净,让其尽量吐出体内的食物残渣，称取10～500g鲜蚯蚓，加入20～1000ml柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液，匀浆后，4℃充分静置，4℃条件下500～20000r·min^-1离心1～30 min，取上清液即为蚯蚓酶液，4℃冷藏备用。

所述蚯蚓酶液提取工序中，也可用干燥蚯蚓粉10～500g，加入10～1000ml柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液来代替新鲜蚯蚓。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：