[发明专利]一种苦丁茶冬青提取物

说明书

技术领域

本发明涉及药用植物提取物领域，具体为一种苦丁茶冬青提取物的化学性质、制备方法及其在制备药品、保健品中的应用。

背景技术

苦丁茶冬青(Ilex kudingcha C.J.Tseng)为冬青科乔本植物，是我国南方常用的苦丁茶品种之一，古籍《本草拾遗》就有关于本品降脂的记载：“久食令人瘦，去人脂”。过去30年来，许多学者对该植物进行了研究(天然产物研究与开发，2005，17(3)：366-370；湖南中医学院学报，2001，21(2)：68-70)。药理实验证明，本品水提物具有抗氧化、扩张血管、降血压、降脂等活性，但味道极苦，许多人难以接受，而且本品也表现出一些毒性。该植物成分相当复杂，已报道的就有皂苷、三萜、甾醇、挥发油、脂肪酸、氨基酸、微量元素、维生素等多种类别，究竟哪种或哪些成分是苦丁茶冬青的主要降脂药效物质，现有公开文献尚未给出明确答案。近年来三萜和皂苷类成分比较受重视，有一些发明专利与这些成分有关，如CN101775061、CN101016328、CN1508149等。有关该植物的酚性成分结构及其药理活性则鲜见报道，关于该植物的毒性成分也不明确。

发明内容

本发明的目的之一是阐明苦丁茶冬青的调节血脂活性成分，同时揭示可能的毒性成分，为合理开发利用该植物资源提供科学依据。发明人通过大量高通量筛选和实验研究，终于确定总酚酸为降血脂和抗氧化活性部位，经色谱分离纯化并应用现代波谱技术测定分子结构，阐明了一系列咖啡酰奎尼酸类成分，其含量高达4％以上，从而首次揭示出苦丁茶冬青调节血脂的有效成分理化性质，为提取路线设计和质量控制奠定了坚实的基础。

本发明提取物中的咖啡酰奎尼酸类都具有下列结构通式(I)，其中R₁～R₃中有1～2个为咖啡酰基，其余为氢，包含六个化合物(见下式)。以往文献未涉及二咖啡酰奎尼酸的绝对构型，本发明人应用CD激子手征性方法对从苦丁茶冬青得到的3，4-、3，5-和4，5-二-O-咖啡酰奎尼酸的绝对构型进行了测定，其CD谱均显示裂分的(-)Cotton曲线，表明环上的两个咖啡酰基为逆时针旋转关系(附图1)，所以C-3和C-5的绝对构型均为R。具体结构式如下所示。

这些咖啡酰奎尼酸类成分均为已知天然产物，它们在植物界广泛存在，但以如此高的含量和特定比存在于苦丁茶冬青，正是本发明意外和有益的重要发现之一。附图2为本发明提取物的典型HPLC色谱图，反映了该总酚酸化学组成的基本概况。

本发明提取物中3，5-二-O-咖啡酰奎尼酸和4，5-二-O-咖啡酰奎尼酸是主要有效成分，二者含量因药材产地、品质、提取方法等因素而波动，含量之和一般为5％～95％(重量)。本发明提取物的化学组成并不仅限于上述咖啡酰奎尼酸，发明人发现，天然的咖啡酰奎尼酸类C-7羧基都是游离的，但在提取分离过程中因接触醇类溶剂，如乙醇、甲醇，可导致少量酯化产物形成，这类次生产物在总酚酸提取物中通常很少，生物活性与酯化前也类似。发明人还发现，酚酸中含有微量黄酮类成分，为槲皮素及其苷类，如芦丁。另外，如附图2所示，提取物中还有若干微量成分有待进一步阐明。

发明人同时发现，苦丁茶冬青水溶性部位味道极苦，毒性明显，其中含有大量已知的皂苷类成分。特别是意外地发现，水溶性部位大量含有一种氰苷类物质，其结构经鉴定为新化合物——苦丁茶氰苷(ilexkudinin)，本品为白色结晶，分子量为313.31，分子式为C₁₄H₁₉NO₇，熔点164～165℃，UVλmax 259nm。经X-ray单晶衍射分析(附图3)确定结构式如下(II)：

苦丁茶氰苷的制备方法：取苦丁茶冬青叶1kg，用95％酒精回流提取三次，合并提取液，减压浓缩，浸膏加入5倍量水搅拌溶解，滤过，清液加5％盐酸酸化至pH 2，滤过，滤液用5％Na₂CO₃中和，减压浓缩，上大孔树脂柱吸附，先用水洗，然后用30％酒精洗，收集30％酒精洗脱部分，减压浓缩，再用高压制备型C₁₈柱(10μm，40×250mm)分离，检测波长254nm，流速80ml/min，洗脱剂为超纯水，根据出峰情况收集流出液，将同一单峰流分合并，减压浓缩，放置过夜，得白色结晶1.3g，即为苦丁茶氰苷。