[发明专利]基于HepG2稳定表达HBV野生株细胞系及其制备方法

权利要求书

1.基于HepG2稳定表达HBV野生株细胞系，其特征在于，所述细胞系为高表达野生型HBV病毒肝癌细胞株，保藏编号：CGMCC No.4909，分类命名：高表达野生型HBV病毒肝癌细胞株HepG2.HSWT；具有以下生物学特性：

能持续表达HBsAg及HBeAg，胞内有HBV复制，并产生HBV颗粒；与Hep2.2.15相比，其表达HBsAg及HBeAg高于Hep2.2.15，细胞上清HBV颗粒水平与Hep2.2.15基本持平，其整合的HBV基因型为B或C基因型；其对LAM及ADV均敏感；HBV胞内复制水平随LAM及ADV浓度上升逐步下降。

2.按权利要求1所述的细胞系的制备方法，其特征在于，将HBV真核表达质粒pREP-HBV-WT转染HepG2细胞后，通过潮霉素筛选，然后检测细胞中HBV复制、特异性抗原的表达及病毒颗粒的产生，并与Hep2.2.15细胞株相比较，最终建成基于HepG2稳定表达HBV野生株细胞系，获得高表达野生型HBV病毒肝癌细胞株HepG2.HSWT。

3.按权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的HBV真核表达质粒pREP-HBV-WT的载体骨架为pREP10载体。

4.按权利要求2方法，其特征在于，所述的HBV真核表达质粒pREP-HBV-WT通过含cp启动子及完整HBV前基因组的HBV1.2倍体，B型(GeneBank登录号AF100309)的复制子插入切除RSV启动子的pREP10，构建成HBV真核表达质粒pREP-HBV-WT。

5.权利要求1的基于HepG2稳定表达HBV野生株细胞系在筛选抗HBV药物中的用途。

6.按权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的基于HepG2稳定表达HBV野生株细胞系选自高表达野生型HBV病毒肝癌细胞株HepG2.HSWT。