[发明专利]双菌共培养制备复合生物菌剂的方法

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种双菌共培养制备复合生物菌剂的方法，属于生物发酵领域，是采用两种不同功能性微生物，在同一个发酵器内，共同培养，最终得到一种制剂，含有两种微生物的产品。

背景技术

复合微生物制剂，被认为是具有微生物复合功能的产品。双菌共培养，其意义还在于两者以彼此的生命活动，产生的物质或造成的环境，相互依存，相互获益。这类产品以微生态复合制剂为代表广泛应用于医药、保健、农业、畜牧业等领域。双菌的组合和共培养的条件，始终是菌剂质量的技术关键。就发明人所知，目前还没有相关技术产品的报道。

发明内容

本发明的目的就是为弥补以上不足，提供一种广泛应用于医药、保健、农业、畜牧业等领域，其生理活性具有明显增强的优势的一种双菌共培养制备复合生物菌剂的方法。

主要技术方案是这样实现的：采用两种不同功能性微生物，在同一个发酵器内，共同培养。依靠两种微生物彼此的生命活动，产生的物质或造成的环境，相互依存，相互获益。同时获得一种制剂，含有两种微生物的产品。双菌共培养制备复合生物菌剂的方法，包括功能菌种的培养、选择和组合，培养基配方和制备、培养条件的控制和设计，其特征在于根据菌种的生理特点分别采取生长速度和周期各异、彼此营养互补、能共寓于同一环境的两种微生物，经过共培养，获得含有两种功能菌及其代谢物的产品。

所述的菌种包括芽孢杆菌属、乳酸菌属、酵母菌属、醋酸菌属、固氮菌属、根瘤菌属等多种微生物。具有产多种活性酶、多种有机酸、维生素及固氮、解磷、解钾、抗虫、抗病、刺激生长的功能。应用在农业，能有效地改善作物营养，提高抗逆性，改善品质，增加产量。

所述的共培养，是采用发酵工业通用的液体深层培养罐，根据各菌种的需要选择适宜生长的培养基，通气条件培养，菌体达最大数量，成熟放罐。

所述的共培养，也可以根据需要，采用液体深层静置培养，根据各菌种要求选择适宜培养基，主要是在厌氧条件下使其发酵，获得一定数量的活菌和发酵产物。

所述菌种制备方法用的斜面培养基具有如下组份及较佳重量配比：蛋白胨8～12g牛肉膏4～6g葡萄糖1～3g琼脂12～20g蒸馏水1L。

所述的菌种液体培养用的培养基具有如下组份及较佳重量配比：

大豆水解物10～30g蛋白胨4～10g蔗糖16～24g KH₂PO₄3～8gMgSO₄1～6g水1L。

所述的菌种液体深层静置培养用的培养基，具有如下组份及较佳重量配比：

蔗糖10～30g蛋白胨4～10g酵母膏5-10g KH₂PO₄5～10g MgSO₄1～6g水1L。

本发明的积极效果是：在同一培养器内，通过双菌共培养，获得一种具有两种功能微生物的产品。提高了生产效率，大大节约了生产成本。

与现有技术相比：本发明首先将两种特定功能的微生物，共培养于同一培养器，同时获得两种微生物的活体细胞及代谢产物。与单独分别培养，其生理活性具有明显增强的优势。

本发明实施效果：

复合生物菌剂与单独巨大芽孢杆菌对土壤中水溶性磷含量的影响(接种后10昼夜)

实验结果表明，复合菌组接种于土壤后10昼夜，土壤水溶性磷不但远远超过对照，而且比单独接种巨大芽孢杆菌的土壤水溶性磷增加了30.8％。

复合生物菌剂与单独固氮菌对土壤固氮能力的影响的比较

将复合菌剂与固氮菌分别接种于未经灭菌的土壤中，以不接菌为对照。经5、10、I5、昼夜的培养，取各处理及对照土壤1g接种到被Dobere i ner无氮培养基浸湿的石英砂上(每皿放石英砂25g)，在第10昼夜测定所固定的氮量。实验结果表明，复合菌剂接种的土壤，经5、10、15、昼夜培养所固定的氮量分别比对照增加75.6％、89.2％和、84.2％，分别比单独接种固氮菌时增加20％、25％和22.1％

具体实施方式

实例1.

斜面菌种：巨大芽孢杆菌①，固氮菌②试管斜面，于25-32℃恒温培养，24-72h。

菌种悬液：将菌种①②试管斜面，分别倒入无菌水，刮取菌苔，制备菌悬液。

菌种混合：将菌种①②的菌悬液，按比例混合。

液体培养基：菌种液体培养用的培养基具有如下组份及重量配比：