[发明专利]雪卡毒素钠离子荧光探针检测法

权利要求书

1.一种雪卡毒素钠离子荧光探针检测法，其特征在于：包括如下步骤：

A）培养细胞，种96孔黑板，置于细胞培养箱中培养；

B）培养24 h后，弃去培养基，PBS洗涤2~3次，选用不同浓度的雪卡毒素染毒细胞；

C）染毒12~24 h后，弃去培养基，加入钠离子荧光探针染色，置于细胞培养箱中避光孵育；

D）平衡盐溶液洗涤2~3次后，多功能酶标仪检测各孔的荧光强度；

E）建立钠离子荧光探针检测法的标准曲线。

2.根据权利要求1所述的雪卡毒素钠离子荧光探针检测法，其特征在于：所述步骤A）包括：培养小鼠脑神经瘤细胞（N-2a），待细胞长至80~90%汇合度，用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化收集细胞，离心后去上清液，加入RPMI-1640培养基重悬细胞使其密度为3×10⁵个/mL，接种100 μL细胞悬液于96孔黑板中，置于细胞培养箱中培养。

3.根据权利要求1所述的雪卡毒素钠离子荧光探针检测法，其特征在于：所述步骤B）包括：设置实验组：每孔加入90 μL0.25 mmol/L的乌苯苷溶液和10 μL 雪卡毒素标准品（P-CTX-1）或样品溶液，雪卡毒素标准品的浓度梯度为1~10⁷ pg/L；设置空白对照组：每孔加入100 μL RPMI-1640基础培养基；设置溶剂对照组：每孔加入90 μL0.25 mmol/L的乌苯苷溶液和10 μL 10%甲醇。

4.根据权利要求1所述的雪卡毒素钠离子荧光探针检测法，其特征在于：所述步骤C）的染毒时间为18 h。

5.根据权利要求1至4中任一项所述雪卡毒素钠离子荧光探针检测法，其特征在于：所述钠离子荧光探针为CoroNa^TM Green。