[发明专利]龙脑樟树工厂化育苗方法

说明书

技术领域

本发明涉及龙脑樟树工厂化育苗方法，具体是通过调整培养基和培养条件来提高育苗效率。

背景技术

龙脑樟树叶是冰片的天然植物资源。樟树喜光，喜温暖湿润气候，对土壤要求不严，较耐水湿，但不耐干旱、瘠薄和盐碱土。由于早期对樟的开发利用多以提取精油为主，过度砍伐，对资源严重破坏，导致一些优良资源开始枯竭，加之市场需求不断扩增，因此，寻找一种有效的樟树繁殖方法具重要意义。

目前樟树以种子繁殖为主，生产上出现种子发芽率低，成苗参差不齐且后代苗木变异较大等问题。利用组织培养，选取优良材料进行扩繁，不仅能快速繁殖生产苗木，且能保持母本的优良遗传性状。目前国内对于樟树组织培养的研究主要集中在无性快繁体系建立(邹晖，2009）、试管苗离体保存(吴金寿，2005）、以及玻璃化苗解决方法探索(魏琴，2006）等方面，但各学者间的观点存在一定分歧，且全方面探讨指导樟工厂化生产的体系有待进一步完善；同时，现有龙脑樟组培技术中普遍存在增殖系数低，苗木易褐化且移栽存活率低等问题，长期制约着龙脑樟组培快繁的发展，因此因而需要进一步筛选优化配方，提高分化率和移苗成活率。

发明内容

本发明提供一种龙脑樟树工厂化育苗方法，可以解决现有龙脑樟组培技术中普遍存在增殖系数低，苗木易褐化且移栽存活率低等问题。

为了实现上述目的，本发明的解决方案如下：

龙脑樟树工厂化育苗方法，通过以下步骤实现：

（1）外植体的采集：采取前三天先喷洒多菌灵溶液进行预处理；选取龙脑含量高的优良单株，取主干下部幼嫩萌枝条作为外植体；

（2）无菌材料的获得：枝条取下后用重量比0.1%的高锰酸钾溶液浸泡处理，饱和洗涤液浸泡处理，再用流水冲洗；再剪成带1-2个节间的茎段，用体积比75%乙醇溶液处理；然后用重量比0.1%的升汞溶液浸泡处理，最后枝条经无菌水清洗后接种于芽诱导培养基上；

（3）无菌培养：将获得的无菌材料在合适条件的光、温、培养基的管理下进行初代培养、增殖培养和生根培养，促使树苗最大化生长；

（4）移栽：将生根后的树苗转移至移栽大棚进行炼苗，5-10天后取出树苗，洗净根部培养基，用重量比0.1%的高锰酸钾溶液浸泡处理，再清洗，沾取ABT生根粉，移栽入基质中，移栽后做好田间温湿度管理，达到符合生产用苗的标准。

步骤（3）中初代培养是MS、6-BA（6-苄胺基嘌呤）和NAA（a-萘乙酸）的混合物，其中6-BA和NAA按质量体积比计分别为2.0 mg/L和0.1 mg/L，其余成分为MS。增殖培养中采用两种不同的培养基交替使用。生根培养的培养基采用1/2改良MS、IBA（吲哚-3-丁酸）和IAA（3-吲哚乙酸）的混合物，IBA和IAA按质量体积比计分别为0.5 mg/L和0.4 mg/L，其余成分为1/2改良MS，培养基中蔗糖浓度为20 g/L。改良MS培养基是将MS基本培养基中NH₄NO₃（硝酸铵）浓度调为825 mg/L，其余组分浓度不变；1/2改良MS是将改良MS中大量元素的含量降低一倍，其余组分含量不变。初代培养和增殖培养采用的培养基中含有卡拉胶6.7 g/L，蔗糖30g/L；生根培养采用的培养基中含有卡拉胶6.7 g/L，蔗糖20g/L；初代培养、增殖培养和生根培养的培养基pH值均为5.8-6.0。

上述培养条件采用：光照时间12±2 小时，光照强度2000-3500 lx，温度25±2℃。

步骤（4）中基质采用草炭:珍珠岩为3:1。

上述增殖培养采用的两种培养基均是改良MS、BA和NAA 的混合物，其中改良MS是将MS中的NH₄NO₃浓度调为825 mg/L，其余组分浓度不变，两种增殖培养的不同在于BA和NAA的质量体积比不同，其中一种培养基在以改良MS为基本培养基的前提下，每升添加BA和NAA分别为 2.0 mg和0.05 mg，另一培养基则是在以改良MS为基本培养基的前提下，每升添加BA和NAA分别为 1.0 mg和0.05 mg

本发明旨在选取龙脑含量高的优良单株，取其主干下部幼嫩萌枝作为外植体，建立组织培养技术体系，并运用于工厂化育苗生产。可运用本发明中的步骤建立一套完整的龙脑樟苗木工厂化生产规程，从而提高工厂化效率。本发明提出两种不同的增殖培养基交替使用，提高龙脑樟的增殖系数，同时不断不断筛选和完善龙脑樟组培的组织培养基、栽培基质和相应的培养和栽培参数解决龙脑樟组培过程中普遍存在的褐化问题，同时提高移栽存活率。