[发明专利]一种从獐芽菜提取獐芽菜苦甙的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物化学的技术领域，具体涉及一种从獐芽菜提取獐芽菜苦甙的制备方法。 

背景技术

獐牙菜(False Chinese Swertia Herb)，拉丁名为Swertia davidi Franch，属龙胆科(Gentian-aceae)，主产于中国，印度，尼泊尔等国。多年生草本，直立。茎四棱无髓光滑，单叶对生，无柄呈披针形或长披针形。花两性，花冠裂片上部具紫色小斑点，中部具两个黄褐色大斑点，花萼裂片近相等，花冠幅状每裂片基部有1-2个腺体，民间称为水黄连、水灵芝、河风草、鱼胆草、青鱼胆草等。土家族群众用于治疗肺热、黄疸、恶疮疥癣、急性肠炎等症。临床应用獐芽菜制剂，对急性菌痢也有较好疗效，其提取物对革兰氏阳性菌有较强的杀灭作用。 

獐芽菜全草具有退黄快、降谷丙转氨酶明显以及缩小肝肿大的作用，而分离的环烯酸萜类化合物对大鼠十二指肠、子宫和脾等器官起抗胆碱功能。这些成分在人体或动物体内可能是通过以下两种作用方式起药效：一种是直接作用，另一种是间接作用也称为辅助神经调节作用。直接作用是指獐芽菜的部分有效成分通过吸收或注射进入体内，参与机体的防御活动，对入侵病菌细胞壁的主要成分胞壁酸的合成起抑制作用，从而达到抑制病菌在体内繁殖或直接杀灭病菌的效果；间接作用是指獐芽菜其他有效成分进入体内后，对分布于肝、脾以及肠胃末端的耙细胞起生理刺激作用，从而引起相应生理器官分泌激素，这些激素能刺激局部神经产生动作电位，进而通过神经传导，最终引起大脑皮层活动，促进垂体分泌腺体活动，实现全身性神经调节功能，达到抵制和吞噬细菌的侵入。 

自20世纪七、八十年代国内就有不少科研院所对獐芽菜的成分进行研究，当时研究的侧重点大部分是其提取物化学成分的组成和结构鉴定。如孙洪发等在獐芽菜中黄酮成分的分离与鉴定一文中表明，獐芽菜经硅胶及聚酰胺柱层析分离到3种化合物，分别鉴定为异红草甙、龙胆苦甙和齐墩果酸。虞瑞生等1984年对分离产物进行先硅胶柱层析再重结晶等步骤处理，可得到乌苏酸和咕吨酮等成分。此前的报道还从提取方法上介绍了极性溶媒和非极性溶媒在提取过程中对有效成分的溶解差异，只有极少数人对獐芽菜药理治疗领域的作用感兴趣。 

到90年代，獐芽菜的研究重点逐渐从有效成分的分离、组成和鉴定转向于獐芽菜在人体内的治病机理和在动物体内的抗感染肝炎试验，胡若琪等1991年做了獐芽菜苦甙对老鼠肝病理形态学影响的研究，研究表明獐芽菜苦甙能有效地保护肝细胞，防止或减轻肝细胞损伤，并能促进肝细胞修复。在此期问，獐芽菜有效成分的结构研究更加深入，中国医学科学院谭 沛等、上海医药工业研究院孔德云等对獐芽菜化学成分研究已进入分子水平，他们从分子领域分别证实了裂环环烯醚萜甙和木脂素等有效成分的差别，为今后从事这方面的研究做出了巨大贡献。本世纪以来，獐芽菜的研究侧重于从各个具体、细微的角度来分析对动物或人类疾病治疗的结果。主要是采用物理或化学方法以及更先进的分离手段从獐芽菜中提取一些微量有效成分，结合其他中草药的有效成分，制成高效复合丸对人或动物在保肝、降火和解毒进行有针对性的试验，结果表明高效复合丸中的獐芽菜苦甙能被皮肤表面吸收，经人体酸及酶分解后的产物可扩张毛细血管，使动脉血管旺行，对肝炎有很好的预防和治疗效果。 

国内外对獐芽菜苦甙的含量检测和药理等方面进行了研究，对小规模提取较高纯度的獐芽菜苦甙未见报道。为此，我们以獐芽菜全草为原料，采用柱层析、结晶与重结晶等手段进行大规模的制备獐芽菜苦甙纯品，作为主治药物与其它成分进行配制，广泛应用于治疗肺热、黄疸、恶疮疥癣、急性肠炎等患者的药物。 

发明内容

本发明的目的就是要提供一种方法简单、成本低、便于工业化生产，所得产品纯度高、杂质少的高纯度獐芽菜苦甙的制备方法。 

本发明采用的技术方案包括：干燥过后的獐芽菜全草经用乙醇溶液提取、过滤、减压浓缩，然后用树脂吸附、乙醇洗脱、将洗脱液浓缩，脱色，结晶和重结晶制得高纯度獐芽菜苦甙。 

因此，本发明提供一种从獐芽菜中提取獐芽菜苦甙的方法，步骤包括： 

(1)粉碎干燥獐芽菜，并将獐芽菜、70％乙醇按重量(kg)/体积比(V)＝1∶1-3进行混合，加热回流提取； 

(2)过滤除渣后，减压浓缩至无乙醇味； 

(3)上大孔吸附树脂LSA-20(西安蓝晓科技有限公司提供)进行吸附分离，并将洗脱物减压浓缩干燥，其中洗脱液为乙醇溶液，将洗脱物进行浓缩，直至获得干燥物； 

(4)加入70％乙醇进行加热溶解，然后加入活性碳进行脱色，再进行浓缩直至获得干燥物；