[发明专利]用于多种细菌的基因检测膜条及其引物

说明书

技术领域

本发明属于基因检测领域，具体涉及可用于多种细菌的基因检测膜条及其引物。

背景技术

病原菌引起的感染性、传染性疾病是威胁人类健康和造成社会恐慌的重要因素，快速准确地检测病原菌是有效预防和治疗感染性疾病的关键。常规的生理生化、血清学鉴定方法操作繁琐，周期长，而且某些病原菌培养困难。PCR、ELISA等方法虽然缩短了检测周期，但假阳性率高^[1，2]，。

基因芯片技术的兴起，使快速、微量、准确、高通量地检测病原菌成为可能^[3]。基因芯片检测病原菌选取的靶基因一般为16s rRNA、16S-23S rRNA、23s rRNA的基因等^[4]，标记基因的方法有Cy3或Cy5等荧光染料、生物素、地高辛等^[4，5]。目前，市场上应用的病原菌检测芯片多采用荧光标记，如天津生物芯片技术有限责任公司出品的系列病原菌检测芯片，北京博奥生物有限公司出品的晶食源性致病菌检测试剂盒等。但是，采用荧光标记的基因芯片需要激光共聚焦微阵列扫描仪、基因芯片点样仪等贵重仪器^[6]，成本高，价格贵。

本研究选取10种常见细菌为研究材料，采用16s rRNA基因为检测靶基因，选择多态区设计探针，硝酸纤维素薄膜条作为固定探针的基质，利用生物素标记16s rRNA基因扩增片段，PCR扩增片段与膜条杂交后，SA-AP(streptavidin labled by alkaline phosphatase，碱性磷酸酶标记的链亲和素)检测生物素标记、NBT(nitroblue tetrazolium，硝基四氮唑蓝)/BCIP(5-Bromo-4-Chloro-3-Indolyl Phosphate，5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸)显色的方法，建立起了一种快速、准确、成本较低的细菌检测方法，具有良好的临床应用前景。本研究对感染性疾病的预防、诊断、治疗具有重大的价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于多种细菌的基因检测膜条产品及其检测时所用的引物。建立起了一种快速、准确、成本较低的细菌检测方法，具有良好的临床应用前景。

一种用于多种细菌的基因检测膜条，包括用于扩增细菌的16S rRNA基因片段的一对引物：

250F：CCTACGGGAGGCAGCAGT；

1020R：CGGGACTTAACCCAACAT；

以及固定有如下所示序列探针中的一种或几种的硝酸纤维素薄膜条，所述探针序列如下：

大肠埃希菌检测探针：

TCC ACG GAA GTT TTC AGA GAT GAG AAT GTG CCT TCG GGA ACC GTG AGA CA

肠道沙门菌检测探针：

TCC ACA GAA CTT TCC AGA GAT GGA TTG GTG CCT TCG GGA ACT GTG AGA CA

粘质沙雷菌检测探针：

TCC AGA GAA CTT TCC AGA GAT GGA TTG GTG CCT TCG GGA ACT CTG AGA CA

阴沟肠杆菌检测探针：

TCC AGA GAA CTT AGC AGA GAT GGT TTG GTG CCT TCG GGA ACT CTG AGA CA

奇异变形杆菌检测探针：

TCC AGC GAA TCC TTT AGA GAT AGA GGA GTG CCT TCG GGA ACG CTG AGA CA

铜绿假单胞菌检测探针：

TGC TGA GAA CTT TCC AGA GAT GGA TTG GTG CCT TCG GGA ACT CAG ACA CA

鲍曼不动杆菌检测探针：

TAC TAG AAA CTT TCC AGA GAT GGA TTG GTG CCT TCG GGA ATC TAG ATA CA

枯草芽孢杆菌检测探针：

TCC TCT GAA AAC CCT AGA GAT AGG GCT TCT CCT TCG GGA GCA GAG TGA CA

溶血性葡萄球菌检测探针：

TCC TTT GAC CCT TCT AGA GAT AGA AGT TTC CCC TTC GGG GGA CAA AGT GA