[发明专利]牛传染性鼻气管炎病毒毒株及制备方法和应用

权利要求书

1.牛传染性鼻气管炎病毒毒株及制备方法和应用，其特征在于包括以下步骤：

a、用无菌棉签提取发病牛鼻腔分泌物送实验室，得腔棉拭子样本；

b、以gB-1和gB-2为引物，用PCR方法进行检测扩增，病料中扩增出特异性片段，以gB-F、gB-R为引物和探针，用PCR和荧光PCR方法检测扩增，鉴定传染性牛鼻气管炎病毒，检测结果均为阳性；

c、在MDBK细胞经培养基加经检测没有IBRV的牛血清，后培养一定时间，长成单层MDBK细胞，用PCR和荧光PCR方法检测的腔棉拭子样本接种于单层MDBK细胞，观察细胞病变，待70％-80％细胞出现病毒病变时，将细胞收入-40℃冰箱保存。

2.根据权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒毒株及制备方法和应用，其特征在于：分离出的牛传染性鼻气管炎病毒毒株，已经在菌种保藏中心登记入册编号为CGMCC No.4655，名称为GD0109。

3.根据权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒毒株及制备方法和应用，其特征在于：采用Reed-Muench法，将分离毒株加入MDBK细胞悬液，逐日观察，计算分离毒株的TCID50效价，分离毒株冻融3次后分装，病毒的TCID50为106.2。

4.根据权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒毒株及制备方法和应用，其特征在于：将分离毒株与IBRV参考阳性血清混合后，观察细胞病变，IBRV参考阳性血清对分离毒株的中和抗体滴度为27。

5.根据权利要求1所述的牛传染性鼻气管炎病毒毒株及制备方法和应用，其特征在于：在作为预防牛的传染性牛鼻气管炎病的工程疫苗的应用。