[发明专利]大口黑鲈快速生长基因及亲本筛选方法

权利要求书

1.大口黑鲈垂体特异性转录因子启动子，其序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种快速生长大口黑鲈亲本的筛选方法，包括以下步骤：检测大口黑鲈亲本中的大口黑鲈垂体特异性转录因子启动子的序列，选择序列如SEQ ID NO.1所示的纯合体作为亲本。

3.根据权利要求2所述的一种快速生长大口黑鲈亲本的筛选方法，包括如下步骤：

1)  从待测亲本中剪取鳍条样品，提取DNA；

2)  以提取得到的DNA为模板，

P1：5’-GCAGAGCCCAAGACAAACAC-3’ （SEQ ID NO.2）

P2：5’-ATGAGGATTGGCAAGGGTGAGTCT-3’ （SEQ ID NO.3）

为引物，进行初次PCR扩增，得到初次PCR产物；

3)  以初次PCR产物为模板，

P3：5’-GATAAAGTAAGACTAAACACAAGC-3’ （SEQ ID NO.4）

P4：5’-CATTCTTCTCAGGCCCCGCT-3’ （SEQ ID NO.5）

为引物，进行二次PCR扩增 ，得到二次PCR产物；

4)  对二次PCR产物进行分析，确定待测亲本的垂体特异性转录因子启动子的是否为SEQ ID NO.1所示序列的纯合体。

4.根据权利要求3所述的一种快速生长大口黑鲈亲本的筛选方法，其特征在于：使用内切酶BsrBⅠ对二次PCR产物进行单酶切，之后对酶切产物进行电泳分析确定待测亲本的启动子的是否为SEQ ID NO.1所示序列的纯合体。

5.根据权利要求3所述的一种快速生长大口黑鲈亲本的筛选方法，其特征在于：初次PCR扩增的反应体系为：

ddH₂O：                                    14.8μL；

10×buffer ：                             2.0 μL；

MgCl₂（25 mmol/L）：                   0.8 μL；

dNTP（10 μmol/L）：                    0.4 μL；

上下游引物（20 μmol/L）各：       0.4 μL；

DNA模板                                    1.0 μL；

Taq酶（5U/μL）                           0.2 μL。

6.根据权利要求3或5所述的一种快速生长大口黑鲈亲本的筛选方法，其特征在于：初次PCR扩增的程序为：94℃预变性 4 min；94℃变性30秒，53℃退火90秒，72℃延伸30秒，32个循环；72℃延伸 10 min。

7.根据权利要求3所述的一种快速生长大口黑鲈亲本的筛选方法，其特征在于：二次PCR扩增的反应体系为：

ddH₂O：                                    14.8μL，

10×buffer ：                             2.0 μL，

MgCl₂（25 mmol/L）：                  0.8 μL；

dNTP（10 μmol/L）：                    0.4 μL；

上下游引物（20 μmol/L）各：      0.4 μL；

初次PCR扩增产物：                     1.0 μL；

Taq酶（5U/μL）                           0.2 μL。

8.根据权利要求3或7所述的一种快速生长大口黑鲈亲本的筛选方法，其特征在于：二次PCR扩增的程序为：94℃预变性 4 min；94℃变性30秒，50℃退火15秒，72℃延伸30秒，32个循环；72℃延伸 10 min。