[发明专利]桃枝条溃疡病菌的特异性PCR鉴别方法

说明书

技术领域

本发明属有害生物分子诊断领域，具体涉及一种桃枝条溃疡病菌(Phomopsis amygdali)的特异性PCR鉴别方法。

背景技术

桃(Prunus persica)属温带落叶果树，是原产于我国的一种果树。桃树品种很多，世界上大约有3000余个品种，其中我国有1000种以上。根据它们对气候条件的适应性、生长特性和果实特点，可分为若干品种群。

以果实性状和成熟期分类，具体如下：①按果形分为普通桃、扁形桃(即蟠桃)。②按果皮茸毛有无分为毛桃、油桃，其中油桃是普通桃的单项变异。③按核与果肉的粘离度分为离核、粘核和半粘核。其中粘核是进化类型，离核品种果肉组织较松，有成熟不匀的现象。粘核品种果肉较致密，纤维少，果肉成熟度较为均匀，宜加工制罐。④按果肉质地分为肉溶质、肉不溶质及硬肉桃3种类型。其中溶质型果实成熟时柔软多汁，适宜鲜食。溶质型又可分为软溶质型和硬溶质型。不溶质型果实成熟时质地坚韧，富弹性，适于加工制罐(但还要求果肉不染红色)。硬肉桃果实初熟时果肉硬而脆，完熟时呈粘质，并变面，故以完熟前食用品质为佳。⑤按果肉颜色分为白肉桃、黄肉桃和红肉桃。⑥按果实生长日期分为特早熟品种、早熟品种、中熟品种和晚熟品种、特晚熟品种。

以生态分类，具体如下：①北方品种群。主要分布于华北、西北、华中一带。以山东、河北、北京、山西、河南、陕西、甘肃及新疆栽培较多。本品种群比较抗寒和耐旱，不耐温暖多湿气候。②南方品种群。主要分布于我国长江以南的江苏、浙江、四川、贵州、湖北及湖南等省。该地区属于北亚热带和中亚热带的湿润性气候。本品种群又可分为水蜜桃、硬肉桃和蟠桃3种类型。水蜜桃果实多圆形，顶部平圆，果皮易剥离，果肉柔软多汁，不耐贮运。硬肉桃果实顶端有短尖，缝合线浅，肉质硬脆质密，汁液较少，较耐贮运。蟠桃果肉柔软多汁，多为水蜜桃型。③南欧品种群。系由我国甘肃、新疆向西传入欧洲后经长期驯化形成的品种。主要分布在地中海沿岸诸国。该地区属地中海式气候，在我国北方栽培比较适宜。

我国除黑龙江省外，其他各省、市、自治区都有桃树栽培，主要经济栽培地区在华北、华东各省，较为集中的地区有北京海淀区、平谷县，天津蓟县，山东肥城、益都、青岛，河南商水、开封，河北抚宁、遵化、深县、临漳，陕西宝鸡、西安，四川成都，辽宁大连，浙江奉化，上海南汇、奉贤，江苏无锡、徐州。据2007年资料统计全国栽培面积已超过900万亩，生产桃40万吨，居世界第一位。宁波奉化、无锡阳山水蜜桃以及上海南汇水蜜桃、奉贤黄桃名闻遐迩。种桃已成为我国各地农民重要的主要经济收入来源。

桃树上传统的病害种类很多，如树脂病、缩叶病、褐腐病等等，已为我国广大果农所熟悉。2009年春季在浙江嘉兴锦绣黄桃基地、上海南汇水蜜桃基地的部分果园内发生严重的枝条溃疡病，株发病率达30-40％，导致严重的产量损失。该病害在秋季通过叶痕，在春季通过芽、芽鳞痕、花、果痕等侵染桃树树枝，溃疡主要以枝条上节点为中心，初期红褐色，逐渐下陷成茶褐色，病害发展到初夏时可以杀死幼嫩枝条导致枝枯，并由此导致发病枝条果实不能长大而失去商品性。

桃树枝条溃疡是一种由Phomopsis amygdali病菌侵染所致的真菌病害，目前在我国还未见报道。国际上该病于1934年在美国新泽西州首次发现，随后在上世纪40-50年代相继在马里兰、特拉华、弗吉尼亚、纽约、马萨诸塞等州发现，上世纪90年代后在阿拉巴马、佐治亚和南卡罗来那等美国东南部地区也有发现。

本发明经对我国上海、浙江嘉兴等地的水蜜桃、黄桃枝条溃疡的病原进行研究，发现其病原一致，均为Phomopsis amygdali病菌，但该病菌危害桃枝条的情况在我国至今还未见报道。由于桃果实腐烂的发生也很严重，本发明同时还对其也进行了研究，发现其病原并不是Phomopsis amygdali，而是Phomopsis属内的其它菌种，且存在不同种病原真菌的混合侵染现象。危害桃枝条溃疡、桃果实腐烂的病菌虽然是同属不同种，其菌落、孢子形态相似，但在分子水平却有明显差异。因此，建立桃枝条溃疡病菌的快速检测方法，对于该病的快速诊断及防治具有非常重要的现实意义和应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种桃枝条溃疡病菌(Phomopsis amygdali)的特异性PCR鉴别方法，以弥补现有技术的空白。