[发明专利]一种增强小分子有机物的免疫原性的方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫学领域，特别涉及一种能够增强小分子有机物的免疫原性的方法。

背景技术

抗原是一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫应答，并能与相应的免疫应答产物在体内或体外发生特异性结合的物质。抗原具有两种特性：①免疫原性(immunogenicity)即抗原能刺激特定的免疫细胞，使免疫细胞活化、增殖、分化，最终产生免疫效应物质(抗体和致敏淋巴细胞)的特性。②免疫反应性(immunoreactivity)即抗原与相应的免疫效应物质(抗体和致敏淋巴细胞)相遇时，可发生特异性结合而产生免疫反应的特性(又称反应原性)。具有这两种特性的物质称为完全抗原(complete antigen)，又称免疫原(immunogen)，大多数蛋白质类抗原属完全抗原。有些简单的有机分子(分子量小于5.0kD的小分子有机物)，单独存在时无免疫原性，当与蛋白质载体(carrier)结合后才有免疫原性，但单独时能与相应的抗体结合而具有免疫反应性，这些小分子物质称半抗原(hapten)或不完全抗原(ineomplete antigen)，如多糖、类脂、某些药物均属半抗原。

应一些实际应用的需要，需要增强小分子有机物的免疫原性，例如：2，3Dinor血栓烷B2(2，3-Dinor TxB2)是存在于尿液中的化学物质，其浓度变化具有显著的临床意义。传统的测定方法如HPLC法操作繁琐且干扰因素多。相形之下，基于ELISA的免疫测定方法就简单快捷的多，但是该方法必须实用高效价的单克隆或多克隆抗体，这就要求增强2，3Dinor血栓烷B2的免疫原性。

传统的增强小分子有机物的免疫原性的方法是通过交叉连接器将其与蛋白载体(如白蛋白)连接。现有技术中，所采用的交叉连接器有EDC、SSMCC等。然而，实践中在很多情况下，采用EDC、SSMCC作为交叉连接器，并不能有效增强目的小分子有机物的免疫原性，这可能是由于在修饰过程中小分子有机物的抗原决定簇被破坏或掩盖。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种能有效增强小分子有机物的免疫原性的方法。

为解决以上技术问题，本发明所采用如下技术方案：

一种增强小分子有机物的免疫原性的方法，其采用交叉连接器将所述小分子有机物与蛋白载体连接，特别是，所述的连接器由线性聚合物在两端修饰活性基团构成，所述线性聚合物的摩尔质量为500～10000kDa。

根据本发明，所述线性聚合物优选为聚乙二醇、聚丙二醇或者环氧乙烷-环氧丙烷共聚物。优选地，所述线性聚合物的摩尔质量为500～5000kDa，更优选3000～5000kDa。

活性基团可以是对于本领域所属技术人员来说已知的各种活性基团。活性基团包括但不限于琥珀酰亚胺琥珀酸酯(NHS Ester)、亚氨酸酯(imidoesters)、马来酰亚胺(maleimides)、芳基叠氮(ary azides)以及酰肼(Hydazides)等。线性聚合物两端的活性基团可相同或者不同。

在一个具体的实施方式中，本发明方法被用于增强2，3Dinor血栓烷B2的免疫原性，其中，所采用的线性聚合物为摩尔质量500～5000KDa的聚乙二醇，所述连接器即由该聚乙二醇在两端修饰琥珀酰亚胺琥珀酸酯构成。可以理解，用于增强2，3Dinor血栓烷B2的免疫原性的交叉连接器同样也可以用于增强11dH血栓烷B2的免疫原性。

在聚乙二醇，聚丙三醇或环氧乙烷-环氧丙烷共聚物的基础上修饰活性基团是本领域所属技术人员根据常规手段可以实现的。在此不进行详细说明。

本发明所述的小分子有机物通常为分子量小于等于5000的有机物。

由于采用以上技术方案，本发明与现有技术相比具有如下优点：

本发明采用具有特定结构的交叉连接器，采取该连接器将小分子有机物和蛋白载体连接后，小分子有机物的抗原决定簇不容易被掩盖，从而其免疫原性显著增强。此外，本发明的连接器的制备也非常容易，方法简单，成本低。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明不应仅限于这些实施例。

一种增强2，3Dinor TxB2免疫原性的方法，具体步骤如下：

(1)将5mg的2，3Dinor TxB2(1ml)和10mg(1ml)白蛋白加入一15ml试管中。

(2)加入20mg交叉连接器(1ml)，该连接器由摩尔质量4000kDa的PEG两端修饰了琥珀酰亚胺琥珀酸酯构成。