[发明专利]黄秋葵果实中两个活性黄酮苷的制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明属于提取分离技术领域，具体为黄秋葵果实中两个活性黄酮苷的制备方法及其用途。

背景技术

黄秋葵为锦葵科秋葵属植物，在我国南北方地区均有栽培。黄秋葵被许多国家定为运动员的首选蔬菜及老年人的保健食物，在美国和日本等国家被称为“植物伟哥”及“绿色人参”，是一种具有较高营养价值的优良的食疗保健蔬菜。

黄秋葵中含有黄酮、多糖、果胶、微量元素、氨基酸等多种功效成分，具有抗疲劳、增强人体免疫力，保肝强肾，抗衰老、降低血糖、帮助消化、清火明目、健胃润肠等方面的作用。黄秋葵因其良好的功能和保健作用越来越受到人们的喜爱。对黄秋葵进行深加工可以提高其附加值。但黄秋葵果实的采收具有一定的季节性，嫩果作为保健蔬菜存在保质期短，不便长期保存的弊端。因此需要将黄秋葵嫩果进行精深加工、以提高其附加值及资源利用率。

黄秋葵果实中含有大量的黄酮类成分，已知黄酮类化合物是一类存在于植物界的重要的生物活性物质，据研究报道，它不仅能作为防治心脑血管疾病的药物，而且有明显的抗脂质过氧化、抗衰老、清除自由基，降血脂、降低胆固醇、降血糖，抗癌防癌、免疫调节等生理活性，是一种在人类的营养、健康和防治疾病方面有着广阔应用前景的药物，也是应用广泛的天然抗氧剂和防腐剂，可用于保健食品和化妆品，因此具有很好的开发应用价值。目前未见有对黄秋葵果实进行其黄酮苷类化合物的分离鉴定及生物活性研究的报道。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种黄秋葵果实中两个活性黄酮苷的制备方法及其用途的技术方案，具有工艺操作简单、生产成本低、收得率及纯度高，无污染、易于产业化生产等优点，制得的两个黄酮苷具有很好抗氧化及抑菌活性，适合用做中药化学对照品、医药原料，也可用做保健品、食品添加剂等。

所述的黄秋葵果实中两个活性黄酮苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）原料的处理：取黄秋葵嫩果，以横段面切片后晒干或风干，备用；

2）渗漉提取：将干燥的片状黄秋葵果实装入渗漉筒中，用折合黄秋葵干燥果实1～2倍量的40％～70％含水乙醇浸润4~6小时后装入渗漉桶中，用折合黄秋葵干燥果实10～18倍量的50％～70％含水乙醇进行渗漉提取，调节流速，以8~15 mL/min流速收集渗漉提取液；

3）闪蒸浓缩：将渗漉提取液在水浴温度60～70℃，真空度为0.090 Mpa～0.095 Mpa的条件下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩，调节待浓缩液的进液速度，以150～350 mL · min^-1的流量反复浓缩，得到折合每毫升浓缩液含0.5～1.0克原药材的浓缩液；

4）脱色除杂处理：将浓缩液用石油醚萃取脱色除杂3～4次，每次用量为浓缩液与石油醚的体积比为1:1～1:3，将石油醚萃取液合并后进行真空浓缩，回收石油醚，萃取脱色后得到的浓缩液备用；

5）醇沉转移出多糖与果胶：在上述浓缩液中加入95％的工业酒精调整至浓缩液中乙醇浓度达到70％～80％，放置过夜，析出多糖与果胶沉淀，将沉淀物转移出去另行利用，得到除糖后的浓缩液；

6）继续真空浓缩：得到除糖后的浓缩液继续在50℃以下真空闪蒸浓缩，得到折合每毫升浓缩液含1.5～2.0克原药材的浓缩液；

7）大孔树脂分离富集：得到的浓缩液通过Diaion HP-20大孔吸附树脂柱色谱分离富集，然后先用H₂O洗脱，再依次用10%～70%含水甲醇或含水乙醇进行梯度洗脱，最后用70%丙酮洗脱，分别收集3倍柱体积的各部位洗脱液，合并20%~60%含水甲醇或含水乙醇部位的洗脱液，将合并的洗脱液在50℃以下真空闪蒸浓缩，得到洗脱浓缩液；

8）凝胶树脂分离纯化：将上述合并的洗脱浓缩液继续通过Toyopearl HW-40柱色谱，以H₂O、20% 含水甲醇或含水乙醇、40%含水甲醇或含水乙醇、60%含水甲醇或含水乙醇、70%丙酮梯度洗脱；

9）步骤8）中20% 含水甲醇或含水乙醇洗脱部位减压浓缩干燥后，溶于少量水后通过MCI gel CHP-20 P柱色谱，以H₂O及不同浓度的含水甲醇或含水乙醇梯度洗脱，TLC检识，相同流分合并，得化合物2的浅黄色结晶；

10）步骤8）中40% 含水甲醇或含水乙醇部位通过Sephadex LH-20柱色谱，以水及不同浓度的含水甲醇梯度洗脱，TLC检识，相同流分合并，得化合物1的的浅黄色粗品。