[发明专利]一种猪脾转移因子注射液的生产方法

说明书

技术领域  本发明涉及一种用于生产猪脾转移因子注射液的方法，属于兽用生物制品领域。

背景技术  1949年，Lawrence首次发现结核菌素阳性供者的活淋巴细胞能使皮试阴性受者转变为皮试阳性。以此为依据，1953年至1955年，Lawrence等将其对应的白细胞可透析物质(DLE)重复实验后，发现DLE具备活淋巴细胞同样的功能，即其提取物仍具有转移迟发型变态反应的作用，并将这种能将供体的某种特定的细胞免疫功能特异地传给受体，使受体也具有该种细胞免疫力的物质称为转移因子(Lawrence HS.Transfer Factor·Advan Immunol，1969，(2)：195；Lawrence HS.The transfer in human of delayed skin sensitivity to Streptococcal M Substance and to tuberculinwit

目前，在抗病毒的预防和治疗中，急需的是一种具有良好的活化机体细胞免疫功能的免疫增强剂和能够恢复机体正常免疫水平的免疫调节剂。二者应具有以下特性：能促进体液和细胞介导的免疫，也能作用于弱免疫性抗原；能以不同途径使用，也能用于不同抗原；能在免疫抑制个体中发挥调节作用；用于食用动物不应有毒素残留；能有效影响免疫反应，质量稳定；廉价且容易生产。当今在生物制品中关于免疫增强剂方面是研究的热点，其中又以微量、高效、无残留特性的转移因子更受关注。据报道，动物TF的化学本质为一种小肽与寡核苷酸复合物，能自由通过半透膜。粗制TF是小分子多肽和多核苷酸物质，含有K、Na、Ca、Mg、Zn等金属元素，多核苷酸含核糖和碱性腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、6种以上氨基酸，等电点为4.48，其多肽部分富含天冬氨酸，肽链N末端可能封闭，多肽与小分子RNA比例为2∶1。由于TF分子质量小，不具抗原性，应用后不刺激机体产生抗体，而不会被抗体中和，可以反复使用，结合并激活淋巴细胞(Lawrence HS.Transfer Factor·Advan Immunol，1969，(2)：195；孙卫民，王惠琴.细胞因子研究方法学.北京：人民卫生出版社，2001；祁海燕，万芷芳.山羊单纯疙疹病毒I型特异性转移因子活性成分的生化鉴定.第四军医大学学报，1992，14(2)：113-115；何理平.转移因子在动物医学上的研究进展.湖北畜牧兽医，2003，(6)：44-49).)

发明内容

本发明是以健康猪脾脏为原料，经预处理、匀浆、超声裂解、超滤分离、灭活等一系列生产工艺，用于生产猪脾转移因子注射液。

猪脾转移因子注射液的生产方法，主要是：

1.预处理  取健康新鲜或冷冻的猪脾脏，去除外包装解冻(勿损内包装)，放入缓冲区，用1％TH4+(TH4+为复方季铵盐消毒剂，商品名称为“法国TH4消毒液”，法国SOGEVAL生产，上海罗曼动物保健品公司代理销售)浸泡消毒5min后，去除内包装。称取脾脏，先用纯化水清洗3次，再用注射用水清洗1次，洗毕控水。剔除脾脏被膜上的脂肪组织、系膜，用灭菌生理盐水清洗脾脏2次，称重。

2.匀浆  将脾脏用绞肉机(JR-100D，诸城市华都机械科技有限公司)绞碎，按1∶1比例加入灭菌注射用水后用匀浆机(24CB10C，美国Waring生产)匀浆。

3.超声裂解  取匀浆液在超声波粉碎仪(BCD-2000，必能信(美国)有限公司生产)中超声裂解(2～8℃)，收取裂解后的浆液，-20℃冻存待用。

4.超滤分离  浆液经4℃，6000r/min离心15min，收集上清液，经5μm滤柱(5μm，天津膜天膜有限公司生产)预滤后，再通过30KDa的中空纤维超滤柱过滤(30KDa，天津膜天膜有限公司生产)，然后经过6KDa的中空纤维超滤柱(6KDa，天津膜天膜有限公司生产)过滤即为原液。

5.灭活  向原液中加入最终浓度为0.05％的甲醛溶液，37℃灭活12h，2～8℃保存，应不超过14日。

具体实施方式

一、猪脾转移因子注射液的制备

1.脾脏的预处理  取出采集或定点存放的猪脾脏，去除外包装解冻(勿损内包装)，放入缓冲区，用1％TH4+浸泡消毒5min后，去除内包装。

清洗：称取脾脏，先用纯化水清洗3次，再用注射用水清洗1次，洗毕控水。

除脂肪：剔除脾脏被膜上的脂肪组织、系膜，用灭菌生理盐水清洗脾脏2次，称重。