[发明专利]家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法有效
| 申请号： | 201110123586.7 | 申请日： | 2011-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN102242147A | 公开（公告）日： | 2011-11-16 |
| 发明（设计）人： | 周继勇;钟伯雄;颜焰;危浩;阮系真;庄兰芳;郑育良 | 申请（专利权）人： | 浙江同点生物科技有限公司;浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/04 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林怀禹 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市江干区*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 家蚕 中部 腺细胞 合成 分泌 狂犬病 病毒 核蛋白 方法 | ||
1.一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法，其特征在于该方法的步骤如下：
（1）采用分子生物学技术构建家蚕合成分泌狂犬病病毒核蛋白的载体pBSer1RVNP-A3EGFP质粒；
（2）采用显微注射转基因家蚕方法将pBSer1RVNP-A3EGFP质粒及能够提供转座酶trans的辅助质粒导入家蚕已解除滞育的受精卵内，蚕卵孵化后饲养至成虫，自交续代为G1代，在G1代转基因家蚕的小蚕期，通过荧光体视显微镜观察选择表达EGFP标志基因的转基因家蚕，饲养至成虫自交续代为G2代，G2代以后均采用蛾区育，成虫自交续代，再经1-3代选种，每代采用转基因昆虫荧光基因表达相对量无损伤测定方法，以表达EGFP标志基因及丝胶蚕性状为留种筛选标志，育成中部丝腺细胞能够合成分泌狂犬病病毒核蛋白、基因纯合的转基因家蚕新品种。
2.根据权利要求1所述的一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法，其特征在于：所述的pBSer1RVNP-A3EGFP质粒是以piggyBac转座质粒为基础，质粒带有Amp抗性基因以用于质粒的扩增和筛选，包含 piggyBac转座子的2个转座臂PBL和PBR，包含 2个功能表达框，一个是A3启动子启动的绿色荧光蛋白基因表达框A3 Promoter+EGFP+SV40，以用作转基因阳性家蚕的筛选标志，另一个是家蚕丝胶蛋白1启动子、带有便于提纯外源蛋白的His接头以及狂犬病病毒核蛋白基因的表达框Ser1 Promoter +His+hLYZ+SV40，以表达狂犬病病毒核蛋白，辅助质粒包含Amp抗性基因、piggyBac转座子的1个转座臂PBR、A3启动子启动的转座酶trans基因表达框A3 Promoter+ trans，以提供转座酶。
3.根据权利要求1所述的一种家蚕中部丝腺细胞合成分泌狂犬病病毒核蛋白的方法，其特征在于：采用显微注射转基因家蚕方法将pBSer1RVNP-A3EGFP质粒及能够提供转座酶trans的辅助质粒导入家蚕已解除滞育的受精卵，其家蚕品种是突变品种丝胶蚕，所述的以丝胶蚕性状为每代的留种筛选标志，其筛选的时期是蚕茧时期。
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