[发明专利]一种重组蛋白的制备方法及其应用

说明书

技术领域

 本发明涉及使用重组蛋白TNFR2-Fc-IL-1ra用于治疗骨性关节炎疾病。

背景技术

 骨性关节炎(osteo arthrosis, OA)从关节软骨起病,影响整个关节结构，包括软骨下骨、韧带、滑膜、关节囊及关节外肌肉，最终因关节软骨全部脱失而导致关节畸形和功能丧失的一种疾病。骨性关节炎是世界上最常见的关节病,随年龄增大，患病率迅速上升，大于65岁人群中50%以上有骨性关节炎的X线片表现。骨性关节炎是老年人关节疼痛和致残的主要原因。据世界卫生组织(WHO)统计，骨性关节炎在女性患病率中占第四位，在男性患病率中占第八位，我国60岁以上者膝骨关节炎发病率高达49%。该疾病所导致的疼痛、关节功能障碍，严重降低了中老年人的生活质量，且增加了患者的医疗费用,因而备受重视。

骨性关节炎又称退行性关节炎，是由于关节组织发生了一系列生化变化, 导致其组织正常降解与生成紊乱。近年来的研究表明，这些变化归因于一个复杂的细胞因子网络。当关节内存在炎性损伤时，会引起滑膜炎，继而刺激滑膜和软骨细胞产生细胞因子，如白介素-1( IL-1) ，肿瘤坏死因子-α( T NF-α) ，一氧化氮( NO) ，这些细胞因子会促使基质金属蛋白酶( matr ix metallo proteinases,MMPs) 和纤维蛋白溶酶原激活物( PA) 增多，从而作用在关节软骨上， 使之被破坏, 继发性地引起胶原合成增多、软骨细胞增殖以及前列腺素( PG) 合成增多。而以上这三种改变都可由一些细胞因子如胰岛素样生长因子( IGF-1) , 转化生长因-β( TGF-β) 通过一系列途径引起。这些细胞因子相互调控, 形成复杂网络, 参与着OA 软骨的损伤与修复。在分解代谢层面, MMP 的合成增加, 而其抑制物和细胞外基质成分因炎性介质( 如IL-1, IL-17, IL-18, T NF-α) 而减少。另一方面，合成性细胞因子IGF-1，转化生长因子TGF-β和骨形态发生蛋白( BMPs) 可刺激细胞外基质的合成。现就选择其中几种主要的细胞因子作一综述。

Wood等在1983 年首先报道了关节滑液中有IL-1 存在，并且随之发现了类风湿性关节炎和骨性关节炎关节滑液中可检测到高水平的IL-1。IL-1 通过诱导MMP基因表达从而刺激软骨细胞和骨膜产生MMPs，而MMPs 是参与关节组织损伤的主要因素，可以促进骨基质的降解，抑制软骨细胞合成具有透明软骨特性的蛋白聚糖和Ⅱ型胶原促进生成有纤维母细胞特性的Ⅰ型胶原，从而使软骨细胞变性，引起软骨缺损和软骨的生物力学改变。IL-1 还可以促进成骨细胞样细胞的增殖和骨吸收，参与骨质增生和软骨下骨囊形变的形成； 刺激软骨细胞和滑膜细胞产生NO，诱导关节软骨细胞的凋亡； 促进软骨细胞和滑膜细胞产生PGE2，参与炎症反应。IL-1β刺激产生的MMP 和PGE2 还可促进滑膜成纤维细胞合成Ⅰ型胶原，增加OA 滑液中纤维素的含量。IL-1协同TNF-α还可促进血浆酶原激活物的产生。引起软骨基质破坏和滑液微晶体的产生，加重关节滑膜的炎症反应。

TNF-α来源于巨噬细胞、纤维母细胞和软骨细胞等。TNF-α和IL-1一样通过抑制软骨基质合成、诱导MMP产生而在OA 的软骨破坏中发挥重要作用。实验证实TNF-α能抑制软骨降解。OA的软骨细胞表达表达大量的p55TNF-α受体，后者能使OA软骨对TNF-α刺激的敏感性增强。而且OA软骨要比正常软骨产生更多的TNF-α和TNF-α转化酶( TACE)mRNA。由此推之，p55 TNF-α的抑制剂可以使TNF诱导的软骨细胞外基质降解减少。

肿瘤坏死因子(TNF)是炎症性和自身免疫疾病的重要致病因素，抗体Fc片段融合的可溶性蛋白TNFR2-Fc(商品名为Enbrel)是治疗类风湿性关节炎和牛皮癣的重大药物。目前，针对TNF引起疾病的已上市药物中Enbrel(Amgen公司)、Humira(ABT公司)和Remicade(J&G公司)都具有治疗类风湿性关节炎和牛皮癣的作用，但三者的疗效差异较大，Remicade还具有治疗溃疡性结肠炎的作用。导致这样治疗效果差异的原因最主要在于几种药物的组织分布区域和浓度的差异。