[发明专利]一种从牦牛血中提取免疫球蛋白的方法

说明书

技术领域：

本发明属于天然药物提取技术领域，涉及一种从牦牛血中提取免疫球蛋白的方法。

背景技术：

免疫球蛋白(Immunoglobulin，简称Ig)是指具有抗体活性，能与相应的抗原发生特异性结合反应的球蛋白，普遍存在于哺乳动物的血液、组织液、淋巴液及外分泌液中。免疫球蛋白在动物体内具有重要的免疫和生理调节作用，是动物体内免疫系统最为关键的组成物质之一。免疫球蛋白可以分为IgG、IgA、IgM、IgD、IgE五类。人体血清免疫球蛋白的主要成分是IgG，它占总的免疫球蛋白的70-75％，分子量约15万，含糖2～3％。尽管免疫球蛋白千变万化，但都有类似的结构。抗体分子是由两对长短不同的多肽链所组成，四条链通过链间二硫键构成Y型基本结构(H2L2)。人体血清免疫球蛋白IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体，它仅以单体形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG，它在抗感染中起到主力军作用，它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用(调理作用)，中和细菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力(中和病毒)。免疫球蛋白一般用牛乳和猪血提取。近年来，免疫球蛋白广泛应用于开发新型功能性食品添加剂，仔畜饲料以及生物新药和医药生化诊断中，已成为研究和商业等部门重要的物质，前景十分广阔。然而，免疫球蛋白对热的不稳定性使得其产品开发受到很大的限制。

牦牛是我国特有的高原牛种，被称为“高原之舟”，受到高原恶劣但无污染环境的选拔，拥有很强的免疫力。又因为受到高原强紫外线的照射，因此牦牛是天然的无菌资源宝库。牦牛宰杀取肉后其血液往往没有得到利用，全部当做污水排放，不但使牦牛的价值无法充分利用，而且增加了环境负担。

从血液中提取免疫球蛋白，常用的方法有盐析法(如多聚磷酸钠絮凝法，硫酸氨盐析法)、有机溶剂沉淀法(如冷乙醇分离法、辛酸沉淀法)、有机聚合物沉淀法、变性沉淀法、纤维素层析法、凝胶层析法、超滤法等，许多学者对提取免疫球蛋白作过一些深入的研究，但对抗体纯化的综合方法比较的较多，而限制纯化纯度和得率的瓶颈阶段——粗提阶段则研究较少。

发明内容

本发明的目的就是针对上述存在的不足，提供一种从牦牛血中提取免疫球蛋白的方法。

本发明说提供的技术方案是：

1)离心分离：在新鲜的牦牛血中加入抗凝剂，离心，保留血浆；

2)超滤：将血浆用水稀释后通过超滤膜浓缩，洗涤除杂，得截留相；

3)超声提取：将截留相加入到乙醇中超声提取重复2次，合并提取液；

4)沉淀：将提取液调酸，离心得沉淀；

5)冷冻干燥：将沉淀冷冻干燥即得。

所述步骤1)中的抗凝剂为柠檬酸钠，用量为0.3％(V/V)。

所述步骤2)中的超滤膜为截留分子量3000～10000D的多孔纤维超滤膜。

所述步骤3)中的提取溶剂用量为10-15倍量(V/W)，提取时间为20-30min，室温操作。

所述步骤4)中的酸为盐酸或硫酸之一，酸化后的pH为7.3-7.7。

综上所述，本发明存在以下优点：

1)用牦牛血为原料，变废为宝，解决了牦牛宰杀后留下的问题；

2)溶剂简单易得，毒性小，因此后处理简单，成本低，而产品安全性更高；

3)膜分离只需要推动力，不需要蒸发耗热，因此能耗小，低碳化；

4)超声提取速度比一般的溶剂提取效率高，提取温度低，不会使产品因受热分解而损失，也不会引入其他污染物；

5)免疫球蛋白的析出pH离中性近，因此酸用量不大；

6)各步骤处理量大，速度快，适合大规模生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1

在100L新鲜的牦牛血中加0.3％柠檬酸钠，高速离心，使血液分层，保留血浆，通过截留分子量3000～10000D的多孔纤维超滤膜浓缩，加水洗涤，取截留相。截留相用10倍量(V/W)乙醇超声提取20min，重复2次，合并提取液，加入盐酸调解pH为7.3-7.7，离心得沉淀，冷冻干燥即得免疫球蛋白，纯度为78.7％。

实施例2