[发明专利]一种检测秦川牛AMPD1基因连锁突变的方法

权利要求书

1.一种检测秦川牛AMPD1基因连锁突变的PCR-SSCP方法，其特征在 于，以包含AMPD1基因的待测秦川牛全基因组DNA序列为模板，在2× Reaction Mix、ddH₂O、Forward primer、Reverse primer、Golden DNA polymerase、 DNA模板存在的情况下，设计聚合酶链式反应引物，在PCR反应程序下进行 扩增，扩增后对PCR产物进行变性，然后再对变性后的扩增片段进行聚丙烯 酰胺凝胶电泳，利用凝胶成像系统分析，并鉴定其多态片段，得秦川牛AMPD1 基因第11内含子区域第19416位和第19421位分别发生了T＞C和A＞G的 单核苷酸多态性；

所述的聚合酶链式反应引物为：

上游引物：

5′-AACCCTCAGGCTCACCCA-3′18bp；

下游引物：

5′-GGGCTTAGGGCTCTTGGA-3′18bp。

2.根据权利要求1所述的检测秦川牛AMPD1基因连锁突变的PCR-SSCP 方法，其特征在于，所述的PCR反应程序为：

95℃预变性5min，94℃30s，60℃40s，72℃40s，共36个循环， 最后72℃延伸10min，4℃保存。

3.根据权利要求1所述的检测秦川牛AMPD1基因连锁突变的PCR-SSCP 方法，其特征在于，所述的PCR反应体系为：

总体积为15μL的反应体系，包括2×Reaction Mix 7.5μL，ddH₂O 6.1μL， 上游引物0.3μL，下游引物0.3μL，Golden DNA polymerase 0.2μL，含AMPD1 基因序列的DNA模板0.6μL。

4.根据权利要求1所述的检测秦川牛AMPD1基因连锁突变的PCR-SSCP 方法，其特征在于，所述的聚丙烯酰胺凝胶浓度为10％。