[发明专利]一种多重PCR进行鸭亲子鉴定的方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及了进行鸭亲子鉴定的STR标记的PCR扩增和检测以及亲缘关系鉴定的技术方法，适合在鸭养殖和育种中进行种质鉴定和亲缘关系鉴定。

背景技术

亲子鉴定(parentage identification)又称亲权鉴定、个体识别等，它是利用生物学、分子遗传学及医学的理论和技术，从子代和亲代的形态构造或生理机能、遗传的物质基础等方面的相似特点，分析遗传特征，判断亲代与子代是否有亲缘关系的方法(钱林东等，2010)。亲子鉴定技术在日常法医检验以及畜牧业生产中有重要的应用价值，亲子鉴定方法有多种，早期的有血型测试法、白细胞抗原鉴定法和染色体多态性鉴定法等；随着分子遗传学研究的深入，多种基因组水平的分子遗传标记检测技术已应用到亲子鉴定中来，这些DNA分子标记技术是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是DNA水平遗传多态性的直接反映。DNA分子标记具有诸多优点，其中最适合用于亲子鉴定的DNA分子标记有：线粒体DNA标记、DNA指纹标记、小卫星变异重复序列标记、微卫星标记STR等(Hill等，2008)。

微卫星标记(microsatellite marker)又称简单重复序列(simple sequence repeats，SSR)、短串联重复(short tandem repeat，STR)等，已被广泛应用于连锁图谱的构建、个体识别、亲子鉴定、基因定位、遗传多样性分析、疾病诊断等领域。利用微卫星标记进行亲子鉴定在人类法医学上已有广泛应用，在动植物中也有大量报道。利用DNA微卫星标记和SNP位点对未知系谱的动物群体进行亲缘关系鉴定在国际上已有成功应用。1996年国际动物遗传学会(ISAG，International Society of Animal Genetics，http://www.isag.org)年会上提出了牛、猪、马、狗等几种家畜亲子鉴定中使用的微卫星标记建议。张亚平等1995年分离了10个大熊猫微卫星标记可用于大熊猫的亲子鉴定，张于光等在2003年将微卫星标记应用于东北虎的亲子鉴定，都取得了很好的效果，具有很高的准确度；叶俊华等(2005)采用多重PCR和基因组扫描技术检测了公安部直属四家警犬基地进口种犬和准繁犬7个品种共269头样本10个微卫星DNA多态性，结果发现该10个微卫星位点的非父排除率为99.7287％、个体识别率为99.999％，建立了警犬STR-DNA亲子鉴定方法；Ellegren等(1992)用5个马科的微卫星标记判定马的亲权关系可使排除率达98％以上，10个标记排除率达99.99％；Glowatzki-Mullis等(1995)利用不同染色体上的6个多态STR标记检测了238头牛的等位基因频率，成功解决了用传统的血型鉴定方法无法确定的35头牛的亲权确认问题；Ozkan等(2009)利用12个微卫星标记对荷斯坦奶牛群体进行了亲子鉴定分析，其中包括了由ISAG推荐的9个位点，结果表明这12个标记的排除概率至少为99.9％，大部分(95.3％)的亲权关系得到了确认；Stevanovic等(2009，2010)利用11个微卫星标记分别在不同的西门塔尔牛群体中进行亲子鉴定，结果表明其排除概率可以达到99.9％。

目前STR标记在禽类中进行亲子鉴定的研究极少，多用于遗传多样性分析以及遗传基因的流动等(Qu等，2006；Berthouly等，2008，2009)；在水禽中利用STR标记进行亲子鉴定的研究极少，Reichart等(2010)利用蛋白质指纹技术和10个微卫星标记鉴定了棕硬尾鸭间的亲缘关系。以上研究结果表明鸭的微卫星DNA标记研究已经取得了重要进展并有了很好的应用，如何进一步在鸭的育种工作中发挥更大的作用是一个非常值得研究的领域。

我国是世界上最大的肉鸭生产国和消费国，在养禽业中的比重越来越大。我国有许多具有优良遗传特性的地方鸭品种，但是缺乏有效的开发利用，鸭的育种工作进展缓慢，科技含量较低，有必要借助分子生物学的手段辅助提升鸭育种的技术水平和加快育种进展。

建立完整准确的系谱记录是鸭育种工作的基础，对于提升我国鸭育种水平，提高育种效率有着重要作用和意义。利用本方法可以在不改变目前种鸭地面散养、自由交配的饲养模式的前提下准确的建立起两代鸭群间的系谱记录，而且准确快速，有利于加快选育进展。

发明内容