[发明专利]一种毛细管电泳缓冲液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种毛细管电泳缓冲液及其制备方法。

背景技术

毛细管电泳作为一种重要分子生物学技术，已被广泛的用于不同生物分子(DNA、RNA、蛋白质等)的分离。

DNA测序及DNA片段分析等都基于电泳这种技术。在碱基测序过程中，需将DNA产物变性形成DNA样本的单链结构，继而通过毛细管电泳使不同片段长度的单链DNA分子分离以实现DNA序列的测定及特定DNA片段分离及检测。

在STR遗传标记分析过程中，同样需将DNA特定位点的荧光标记产物变性成DNA样本的单链结构，继而通过毛细管电泳将不同长度且不同荧光的DNA片段分离，通过后续软件分析以实现遗传鉴定。

目前，在DNA片段分离及检测最常见的检测设备主要是美国ABI公司的310、3100、3100-Avant、3130和3130xl型遗传分析仪等。上述仪器均属于毛细管电泳仪，该类仪器在电泳时其正负电极需要放置电泳缓冲液。缓冲液的缓冲能力及维持电流稳定的能力决定着全部电泳过程的稳定性及电泳结果的可靠性与重复性。

缓冲溶液就是具有缓冲能力的溶液，提供稳定的pH值，使电渗流稳定，如果样品带电，那么样品所带电荷也是稳定的，从而使得结果可重复性增强。

发明内容

本发明的目的在于提供一种毛细管电泳缓冲液。

本发明提供的电泳缓冲液，pH为7.5-8.5，溶剂是水，溶质包括一种阴离子和金属螯合剂；所述阴离子与所述金属螯合剂的配比为(12.164-48.656)g∶(0.8-1.2)mmol；所述阴离子为N-三(羟甲基)甲基-3-氨基丙磺酸和/或N-三(羟甲基)甲氨基-2-氨基丙磺酸。

上述阴离子、所述金属螯合剂与水的配比为(20-30)g∶(0.8-1.2)mmol∶(90-110)ml，优选为(24.328-25.93)g∶1mmol∶100ml。

上述溶质是所述阴离子和金属螯合剂；所述金属螯合剂优选为EDTA。

上述溶质还包括一种阳离子；所述阳离子为双(三羟甲基)氨基甲烷；所述阳离子与所述阴离子的摩尔比为1∶1。

上述溶质是所述阴离子、所述阳离子和金属螯合剂；所述金属螯合剂优选为EDTA。

本发明的另一目的在于提供一种溶胶缓冲液。

本发明提供的溶胶缓冲液是用上述电泳缓冲液制备得到的。

上述溶胶缓冲液是将上述电泳缓冲液与尿素、2-吡咯烷酮混合制备得到；所述电泳缓冲液与尿素、2-吡咯烷酮的配比是：(8-12)ml∶(45-52)g∶(3-8)ml；优选配比是：10ml∶48g∶5ml。

本发明的又一目的在于提供一种电泳溶胶。

本发明的电泳溶胶是用有机聚合物与上述溶胶缓冲液混合制备得到。

上述有机聚合物与上述溶胶缓冲液的配比是(2-5)g∶100ml，优选是4g∶100ml；所述电泳溶胶的pH为7.5-8.5；所述有机聚合物优选为聚N，N-二甲基丙烯酰胺、聚丙烯酰胺和/或聚N，N-二甲基丙烯酰胺。

上述电泳缓冲液、上述溶胶缓冲液或上述电泳溶胶在毛细管电泳中的应用均属于本发明的保护范围。

实验证明，实施例2，3中缓冲液在被用作毛细管电泳缓冲液之初时，在实验结果上与实施例1缓冲液无显著性差异，基本能够获得理想的分型图谱(均如图1所示)，且无优劣之分。但添加了双(三羟甲基)氨基甲烷的实施例1的缓冲液在电泳次数达到一定程度时候，会比实施例2，3中单纯由TAPS与EDTA组成的电泳缓冲液表现的更加稳定，能够具有较多的使用次数(图2-图7)。

将本发明的电泳缓冲液换成TAE缓冲液、TBE缓冲液或TPE缓冲液进行毛细管电泳得不到标准DNA样品9947A的正确DNA分型(图8-图10)，而实施例1中电泳缓冲液能得到标准DNA样品9947A的正确DNA分型(图11)，进一步说明本发明的缓冲液的效果好，即降低电渗作用、稳定性、重复性都优于其他缓冲液。

附图说明

图1为利用实施例1缓冲液的Typer^TM500分子量内标的STR分型图谱。

图2为用实施例2的电泳缓冲液进行电泳，阳极pH值实时监测结果。

图3为用实施例2的电泳缓冲液进行电泳，进行第48组样本检测时实时荧光监测结果。

图4为用实施例3的电泳缓冲液进行电泳，阳极pH值实时监测结果。

图5为用实施例3的电泳缓冲液进行电泳，进行第64组样本检测时实时荧光监测结果。

图6为用实施例1的电泳缓冲液进行电泳，阳极pH值实时监测结果。