[发明专利]与HCV病毒非结构蛋白NS2特异结合的核酸适体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及与HCV病毒非结构蛋白NS2特异结合的核酸适体及其应用。

背景技术

丙型病毒性肝炎潜伏期长，难以早期诊断和治疗，对人体的危害极大。目前的治疗手段单一。核酸适体以其独特的化学抗体特性成为新一代针对特定蛋白的分子药物或靶向载体。但是目前基于核酸适体的针对丙型病毒性肝炎病毒(HCV病毒)药物或诊断试剂还很缺乏。而且，针对HCV非结构蛋白NS2的核酸适体筛选尚未有报道。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种核酸适体。

本发明所提供的核酸适体，为SEQ ID NO：2所示DNA分子。

上述核酸适体在制备用于诊断和/或预防和/或治疗丙型病毒性肝炎的产品中的应用也属于本发明的保护范围。其中，所述产品为药物或疫苗。

本发明的另一个目的是提供一种用于诊断和/或预防和/或治疗丙型病毒性肝炎的产品。

本发明所提供的用于诊断和/或预防和/或治疗丙型病毒性肝炎的产品，其活性成分为上述核酸适体。其中，所述产品为药物或疫苗。

上述核酸适体在制备用于诊断和/或预防和/或治疗丙型病毒性肝炎的药物载体中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种用于诊断和/或预防和/或治疗丙型病毒性肝炎的药物载体。

本发明所提供的用于诊断和/或预防和/或治疗丙型病毒性肝炎的药物载体，其活性成分为上述核酸适体。

上述核酸适体在制备抑制丙型病毒性肝炎病毒组装和/或释放的试剂中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种抑制丙型病毒性肝炎病毒组装和/或释放的试剂。

本发明所提供的抑制丙型病毒性肝炎病毒组装和/或释放的试剂，其活性成分为上述核酸适体。

上述核酸适体在制备与丙型病毒性肝炎病毒非结构蛋白NS2结合的试剂中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种与丙型病毒性肝炎病毒非结构蛋白NS2结合的试剂。

本发明所提供的与丙型病毒性肝炎病毒非结构蛋白NS2结合的试剂，其活性成分为上述核酸适体。

实验证明，本发明的核酸适体能特异性地与HCV病毒非结构蛋白NS2结合，而不与非结构蛋白NS5B和筛选中的对照蛋白PET200结合。因此，本发明的核酸适体可以作为预防和/或治疗丙型病毒性肝炎的分子药物或者靶向载体，在丙型病毒性肝炎的治疗领域具有广阔的应用前景。

附图说明

图1为固定前后蛋白NS2溶液的UV-Vis光谱。

图2为FITC标记的第二次筛选产物与PET(左)和NS2蛋白(右)作用情况，荧光强度：100-1000。

图3为FITC标记的第五次筛选产物与PET(左)和NS2(右)作用情况，荧光强度：100-5000。

图4为适体序列分别与NS2蛋白的结合情况，荧光强度：300-4000。

图5为适体序列分别与PET蛋白的结合情况，荧光强度：200-400。

图6为适体序列分别与NS5B蛋白的结合情况，荧光强度：200-400。

图7为适体序列抑制HCV的组装或释放。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、相关蛋白和相关溶液的制备

一、带组氨酸标签的丙型肝炎病毒NS2(靶标蛋白)的制备

1、HCV NS2编码基因的扩增

以SEQ ID NO：4所示DNA(即GENBANK ACCESSION NO.AY605046.1)为模板，用引物1和引物2组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物。

引物1(上游引物)：5’-CGCGCGAATTCATGCCGCGTGGAAGC-3’；

引物2(下游引物)：5’-CTGCAGGGATCCTTAGGCCAATCCGTT-3’；

上、下游引物的5’端分别引入EcoR1酶切位点和BamH1酶切位点。

PCR扩增条件：95℃2min；95℃30s，66℃30s，72℃1min，35个循环；72℃7min。

2、原核表达载体的构建

①用限制性酶EcoR1和BamH1双酶切步骤1的PCR扩增产物，得到酶切产物。