[发明专利]鸡传染性支气管炎冷适应致弱疫苗株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及弱毒活疫苗株，尤其涉及鸡传染性支气管炎冷适应弱毒活疫苗株及其应用，属于鸡传染性支气管炎的防治领域。

背景技术

鸡传染性支气管炎(Avian Infectious Bronchitis，IB)是由鸡传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus，IBV)引起的一种急性、高度接触传染性、病毒性呼吸道疾病，其特征是：病鸡咳嗽、打喷嚏、气管啰音；肾脏肿大、苍白，输尿管扩张、有大量尿酸盐沉积，外观呈现典型的“花斑肾”。

鸡传染性支气管炎于1930年在美国北达科塔州首次发现，1931年由Schalk和Hawn首次报道。早期的研究表明，鸡传染性支气管炎病毒主要侵害雏鸡的呼吸道(呼吸型IB)，也危害育成鸡和产蛋鸡群，使之抵抗力降低、产蛋量及蛋的品质下降。1962年Winterfield和Hitchner在美国报道了致肾脏病变型IB的出现。1956年Jungherr报到了1951年分离的康涅狄格株(Connecticut，以下简称Conn)和1941年分离的马萨诸塞株(Massachusetts，以下简称Mass)可引起类似的疾病，但不能交叉保护或交叉中和，从而证明IBV不只一个血清型。

中国在1953年就有呼吸型IB发生的报道，1972年邝荣禄在广东首次确诊IB在中国的存在。目前，IBV在中国大部分地区流行，而且在中国免疫鸡群和非免疫鸡群中有新基因型的肾致病性IBV在流行。

IBV对所有日龄的鸡均可感染，但感染主要侵害1～4周龄的幼鸡和雏鸡，并可引起死亡，随鸡年龄的增长抵抗力逐渐加强。IBV自然感染常在48小时内出现症状，人工接种后从第24小时到第7天始终可从气管、肾、法氏囊中分离出病毒。雏鸡感染后症状严重，死亡率取决于病毒的毒力及鸡群的抵抗力，一般死亡率为20％～30％。本病主要通过呼吸道排毒，传播速度快，距离远，往往整栋鸡舍同时发病。此外，IBV还可通过泄殖腔传播。IBV能够在呼吸道、肠道、肾脏和输卵管等组织器官中复制。上呼吸道是IBV复制的主要部位，通常不论分离株来自何种组织，都可感染鸡的呼吸道并在气管中产生特征性病变。随后出现病毒血症，病毒从上呼吸道广泛分布到其它组织。传统的呼吸型IB，感染病鸡的临床症状以咳嗽、喷嚏和气管发生罗音等呼吸道表现为主。致肾病变型IBV，病鸡临床剖检主要表现为肾苍白肿大，严重者出现典型的“花斑肾”，有大量的尿酸盐沉积，最后常因肾衰竭而死亡。目前，致肾病变型IBV已成为危害养鸡业的重要病原。

免疫接种是防治该病的最有效手段。目前，市场上已经有一些弱毒疫苗在临床上应用，但由于IBV血清型众多，且流行毒株与疫苗株相比在基因水平上存在较大变异，致使现有的疫苗株不能够有效防制IB流行毒株的攻击，IB的防制效果不理想。因此，研究开发新的具有较好保护力的IB弱毒疫苗显得尤为重要。

发明内容

本发明主要所要解决的技术问题是克服现有疫苗株不能够有效防制鸡传染性支气管炎病毒流行毒株的攻击，防制效果不理想等缺陷，提供一株新的鸡传染性支气管炎冷适应弱毒疫苗株，该弱毒疫苗株能够有效抵抗传染性支气管炎病毒的攻击，可提供良好的免疫保护效力。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的：

本发明将传染性支气管炎病毒野生强毒株进行连续低温冷适应传代致弱培养，最终筛选获得一株具有良好免疫保护效力的鸡传染性支气管炎冷适应弱毒疫苗株(LDL70-C株)，其微生物保藏号是：CGMCC No.4711；分类命名：传染性支气管炎病毒(Infectious Bronchitis Virus)；保藏时间是2011年3月28日；保藏单位是：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。保藏地址是：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；

本发明鸡传染性支气管炎冷适应弱毒疫苗株(LDL70-C株)的形态学观察：LDL70-C株病毒尿囊液经离心、磷钨酸负染后在电镱下可见到直径经为80-120nm的冠状毒，毒病毒粒子呈多形性，多数为圆形，有囊膜，表面有呈松散、均匀排列的冠状突起。

本发明冷适应弱毒疫苗株免疫效力评价实验表明，本发明LDL70-C株(P70代毒)具有良好的免疫保护性，主动免疫保护率为80％以上，被动免疫在9天内可以获得90％以上的保护，说明本发明毒株对鸡传染性支气管炎具有良好的保护效力。可有效保护鸡抵抗传染性支气管炎病毒强毒的攻击。安全性试验结果表明，本发明鸡传染性支气管炎冷适应弱毒活疫苗(LDL70-C株)对雏鸡和产蛋种鸡安全，无副反应，安全性好。