[发明专利]一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，尤其涉及一种牛奶及奶粉中泛酸的检测方法。 

背景技术

目前，国内外关于泛酸的检测方法都比较复杂，一般有微生物法、高效液相法和酶联免疫法。酶联免疫法检测结果与实际数值出入较大，高效液相法检测的下限较微生物法要高出很多。

微生物法检测乳品中泛酸是利用植物乳杆菌ATCC 8014对泛酸的特异性，在含有泛酸样品中生长形成的光密度来测定泛酸的含量。现有的微生物法检测泛酸需要经过制备测试菌液、加入缓冲液和水水解，加入盐酸调整pH值进行样品前处理、制作标准曲线、灭菌、接种、培养、使用分光光度计测定。但是检测过程复杂，使用分光光度计需将每个样品放入比色皿，操作繁琐；容易造成交叉污染，结果重现性不好。基于上述问题，开发一种操作简单、重现性好、结果稳定的泛酸检测方法就尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种牛奶及奶粉中泛酸的检测方法，其操作简单、重现性好、结果稳定。

本发明提供了一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法，包括：

a、将牛奶或奶粉原样定容混匀得到溶解液；

b、将溶解液杀菌，得到灭菌液，存储灭菌液，这样才能使在检测时植物乳杆菌的生长不受其他细菌的影响；

c、配制培养基液，这种培养基液中含有除泛酸外能够使植物乳杆菌生长的营养物质，将培养基液杀菌得到杀菌基液，存储杀菌基液；

d、配制不同浓度的泛酸标准品溶液；

e、分别将杀菌基液、 灭菌液、植物乳杆菌和标准品溶液加入微孔板条的相应微孔中，孵育得到测试液；

f、处理测试液，使微生物悬浊其中，用酶标仪读取它们的混浊度；

g、绘制与标准品溶液相对应的测试液中，测试液中泛酸的浓度与测试液混浊度的标准曲线；

h、将溶解液相对应的测试液的混浊度代入标准曲线中，换算得到牛奶或奶粉中泛酸的浓度。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的再一种示意性的实施方式中，步骤a中牛奶的取样量为1mL，且放入50mL的离心管中用蒸馏水或纯水定容并漩涡混匀。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的另一种示意性的实施方式中，步骤a中奶粉的取样量为1g，且放入50mL的离心管中用蒸馏水或纯水定容并漩涡混匀。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的又一种示意性的实施方式中，步骤b中溶解液在超净台用0.2μm 或0.22μm 无菌滤膜过滤杀菌，得到灭菌液，将灭菌液存储于1.5mL或2.0mL无菌试管中。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的又一种示意性的实施方式中，步骤c中加入10mL无菌水至泛酸培养基中，盖好瓶盖，摇匀，得到培养基液，将培养基液在90-100℃水浴中加热至少5 分钟，其间振荡至少2 次，迅速冷却至室温，使用0.2μm 或0.22μm 无菌滤膜过滤杀菌培养基液得到杀菌基液，将杀菌基液存储于15mL无菌离心管中。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的又一种示意性的实施方式中，步骤d中配制了泛酸浓度分别为0、0.04、0.08、0.12、0.16、0.24mg/100g的标准品溶液，且标准品溶液的配制方法为加入1.8-2.2mL无菌水至泛酸标准品瓶中，用移液枪溶解泛酸标准品，用标准品瓶中的溶液冲洗移液枪尖，得到标准品浓缩液，使用标准品浓缩液配制得到不同浓度的标准品溶液。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的又一种示意性的实施方式中，步骤e中取与标准品溶液和溶解液份数对应的微孔板条，分别用移液枪吸取150μL杀菌基液至板条的微孔中，分别用移液枪吸取150μL标准品溶液和灭菌液至指定的微孔中，分别用移液枪吸取植物乳杆菌5μL至板条的微孔中，用粘合箔盖住微孔板条的微孔，在37℃±1℃黑暗条件下孵育20-24小时。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的又一种示意性的实施方式中，步骤f中将微孔板在漩涡混合器上振荡，使微生物悬浊在测试液中，用移液枪吸头破坏微孔液体表面所有的泡沫，用酶标仪在610-630nm或540-550nm条件下分别读取测试液的混浊度。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的又一种示意性的实施方式中，步骤g中将不同泛酸浓度的标准品溶液的浓度和它们测试得到的混浊度绘制标准曲线。

在一种牛奶和奶粉中泛酸的检测方法的又一种示意性的实施方式中，步骤h中将与溶解液相对应的测试液的混浊度代入标准曲线方程中得到其泛酸浓度，将与溶解液相对应的测试液的泛酸浓度换算得到牛奶或奶粉中泛酸的浓度。