[发明专利]一种含有大豆免疫肽的饲料添加剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种饲料添加剂及其制备方法和应用，具体涉及一种具有免疫功能的含有大豆免疫肽的饲料添加剂及其制备方法和应用。

背景技术

目前由于免疫添加剂增强的免疫效果已被广泛认可，禽畜的免疫添加剂被广泛应用，常见的免疫添加剂既有包含西药成份的，也有包含中药成份的，但都存在不同程度的问题，化药免疫增强剂不同程度的存在降低畜禽生产性能，引发多耐药性菌株和残留污染畜产品出现，进而危害人类健康的弊病。因此一种植物蛋白源的免疫添加剂应运而生，一方面其能激活免疫系统，提高T淋巴细胞增殖，巨噬细胞的吞噬能力等，以使接种或饲喂后的禽畜获得较高水平的免疫反应，增强机体抵抗力，另一方面植物蛋白源的免疫添加剂具有消除上述免疫抑制的作用，其毒副作用轻、有害残留少。

Takahashi等从大米清蛋白的胰蛋白酶解物中纯化出的八肽Gly-Tyr-Pro-Met-Tyr-Pro-Leu-Arg和少几个氨基酸的大米肽(oryzatensin)的C末端片段，能诱导人血白细胞的吞噬活性及刺激白细胞周围超氧化离子的产生，具有的免疫调节作用。Yoshikawa和Takahashi应用高效液相色谱技术从大豆蛋白的胰蛋白酶酶解物中得到一个肽链顺序为His-Cys-Gln-Arg-Pro-Arg的六肽，这种肽能刺激巨噬细胞和多核白细胞的吞噬作用，具有免疫调节功能。进一步酶解六肽，又获得了具有同样免疫调节作用的、一级结构为Gln-Arg-Pro-Arg的四肽。Jiun-rong Chen从大豆胃蛋白酶水解液中纯化和分离分别得到的Ala-Glu-Ile-Asn-Met-Pro-Asp-Tyr，Ile-Gln-Gln-Gly-Asn，and Ser-Gly-Phe-Ala-Pro，能够刺激小鼠脾脏淋巴细胞的增殖。大豆蛋白经酶解或微生物水解法可以得到Lue一Lue一Tyr和Tyr-Tyr-Met一Pro一Leu一Tyr只要极低计量(0.1Mu)就可以通过鼠腹膜巨噬细胞激活具有吞噬作用的绵羊红细胞，具有增强人体免疫功能的效果。Fumio等报道，大豆多肽与母本蛋白相比能显著增强大鼠肺泡巨噬细胞吞噬绵羊红细胞的功能，而且大豆多肽的作用优于酪蛋白多肽。Kim等报道，从大豆蛋白水解物中分离并纯化得到了一种抗癌活性肽(9肽)，其相对分子质量为1157KDa。从胰蛋白酶水解大豆蛋白的酶解物中可获得一种6肽，其一级结构为His-Cys-Gln-Arg-Pro-Arg(HCQRPR)，这种肽能刺激巨噬细胞和多核白细胞的吞噬作用，具有免疫调节功能。进一步酶解HCQRPR，又获得了具有同样免疫调节作用的、一级结构为Gln-Arg-Pro-Arg(QRPR)的4肽。曾晓波等利用碱性蛋白酶水解“华杂三号”双低油菜籽(low erucic acid low glucosinalaterapeseed)蛋白，制得具有增强免疫能力和抑制肿瘤生长的潜力的菜籽肽。杨小军等用经氯化钠缓冲液洗涤法制备的面筋蛋白的胃蛋白酶酶解物灌喂小鼠后发现，肠腔SIgA水平提高了28.6％，血清IL-2水平上升了38.4％，这也进一步说明了灌喂面筋蛋白胃蛋白酶酶解物能够增强机体肠黏膜的免疫功能，而且大豆蛋白酶解物的作用优于面筋蛋白酶解物。潘翠玲等也发现，大豆蛋白和酪蛋白酶解物均能不同程度地刺激经PHA诱导的10日龄仔猪外周血淋巴细胞的转化，且大豆蛋白酶解物的促淋巴细胞转化作用最强。

水解法是将天然大蛋白分子中的肽链裂解成小分子的肽段，从而制备具有生物活性的短肽。主要有化学水解法(酸水解法、碱水解法)和生物水解法(酶水解法、微生物降解法)。

蛋白质本身就是生物活性物的前体，选择合适的蛋白酶水解这些多肽链，把具有生物活性的肽段释放出来，从而可制备出具有生理功能的生物活性肽。采用酶法生产活性肽是当前研究的热点。酶法水解具有许多物理、化学改性无可比拟的优点。首先它是一种不完全、不彻底的水解，其产物主要是肽而不是氨基酸；其次是反应的条件温和，反应时间短，效率高，不产生消旋作用，也不破坏氨基酸；再次是产品纯度高，产物易分离，成本低廉等；此外，利用蛋白酶来水解蛋白质时，还可以通过选择酶的种类，控制反应条件等措施来得到具有特定生理功能的生物活性肽。