[发明专利]一种弯孢霉菌及吲哚里西啶生物碱的制备方法和应用

权利要求书

1.一种弯孢霉菌IFB-Z10，其特征是：从海洋白姑鱼肠道中分离得到，在PDA平板上，菌落中央稍突起，青黑色，菌落质地绒毛状，带絮状，灰白色气生菌丝，背部为黑色，经形态及分子生物学鉴定为弯孢霉Curvularia sp.，现保藏中国典型培养物保藏中心，地址：武汉市武昌珞珈山 武汉大学，保藏编号为CCTCC M 2011059，保藏日期为2011年3月8日。

2.一种权利要求1所述弯孢霉IFB-Z10发酵液制备的吲哚里西啶生物碱，其结构为：

。

3.一种权利要求2所述的吲哚里西啶生物碱的制备方法，其特征是由以下步骤构成：

1） 将从新鲜的白姑鱼肠道中分离、纯化得到的弯孢霉IFB-Z10菌丝体块接种到改良查氏培养基中，于摇床上，在150 rpm、28℃条件下培养3天作为种子液；改良查氏培养基的组成为：蔗糖30 g，酵母膏 1.0 g，NaNO₃ 3.0 g，NaCl  0.5 g，K₂HPO₄ 1.0 g，MgSO₄·7H₂O 0.5 g，FeSO₄·7H₂O 0.01 g，1 L 蒸馏水；

2）将种子液接种于改良查氏培养基中，在150 rpm、28-30℃条件下发酵12天;

3）将步骤2所得发酵液经纱布过滤，滤液用乙酸乙酯萃取，真空浓缩干燥得黑色粗浸膏F1；

4） 对浸膏F1进行硅胶柱层析，依次用4倍体积的氯仿，氯仿：甲醇=100:1，氯仿:甲醇=100:2，氯仿:甲醇=100:4，进行洗脱，浓缩100:1段得到黑色浸膏F2；100:4段得到黑色浸膏F3；

5） 对浸膏F2进行Sephadex LH-20分离，得到curvulamine A，合并其他流份得到棕色浸膏F2-1；

6） 对浸膏F2-1用高压液相色谱法，色谱柱：Allsphere ODS 5μm column；流动相：甲醇/水=80/20流速：2.0 mL/min分离得到curvulamine B，保留时间t_R = 26.1 min; curvulamine C保留时间t_R=22.3 min;

7） 对浸膏F3用高压液相色谱法，色谱柱：Allsphere ODS 5μm column；流动相：甲醇/水=48/52，流速：2.0 mL/min分离得到curvulamide A，保留时间t_R=16.3 min; curvulamide B，保留时间t_R=18.1 min。

4.一种权利要求2所述的吲哚里西啶生物碱在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。

5.一种权利要求2所述的吲哚里西啶生物碱在制备治疗阿尔茨海默症药物中的应用。