[发明专利]一种具有抗肿瘤活性多糖组合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种具有抗肿瘤活性多糖组合物的制备方法，本发明方法制备的产品具有直接抑制肿瘤细胞生长和增殖的作用，亦可提高机体免疫力，可作为一种辅助治疗肿瘤的药品或保健品。

背景技术

自上世纪六十年代，真菌多糖作为抗肿瘤的广谱免疫促进剂引起了人们极大的兴趣。大量药理和临床研究表明，真菌多糖类化合物具有复杂的多方面生物活性与功能，对正常的细胞没有毒副作用，真菌多糖主要通过影响网状内皮系统、巨噬细胞、淋巴细胞、白细胞以及蛋白质的合成、抗体生成及干扰素的诱生作用来提高机体免疫功能，增强抗病能力。多糖作为免疫促进剂，可与细胞毒性抗癌药物如氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺(CIX)合用，减轻因化疗所致的免疫功能低下，增强细胞毒抗癌药物的抗肿瘤活性(袁建国，程显好，侯永勤.冬虫夏草多糖组份研究及药理试验[J].山东食品发酵，2004，4：52-55；林新坚，郑永标，陈济琛等.冬虫夏草粗多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α的作用[J].微生物学杂志，2004，24(3)：22-23；Zhang W，Yang J，Chen J，et al.Immunomodulatory and antitumor effects of exopolysaccharide fraction(EPSF)from a cultivated Cordyceps sinensis fungus on tumor-bearing mice.Biotechnol Appl Biochem，2004，15(12)：256-259；Zhou GF，Hua X，Sheng WX.In vivo growth-inhibition of S180 tumor by mixture of 5-Fu and low molecular-carrageenan from Chondrus ocellatus.Pharmacological research.2005，51：153-157)。

国内外很多研究表明，虫草多糖具有抗肿瘤活性，大多数抗肿瘤作用是非直接杀伤癌细胞，即通过刺激人体非特异性防御机能，在癌症病人经放疗、化疗机体免疫力受损的情况下，与放疗、化疗配合治疗可达到治愈疾病的目的(吴庆光，赵珍东，王宗伟.冬虫夏草抗肿瘤作用研究进展[J].中医药导报.2005，11(6)：80-82)。桑黄是寄生于桑树等阔叶树的一种药用真菌，具有独特的抗癌等功效，已引起国内外医药界与保健品行业不少专家的关注。其抑制肿瘤的研究主要集中在桑黄多糖方面，作用机制是通过细胞调节和体液免疫来提高机体的免疫力，进而达到抑制肿瘤细胞生长和转移的目的(沈业寿，郑立军，王正亮.桑黄胞内多糖抗肿瘤效应的实验研究[J].癌变畸变突变，2007，19(4)：305-308)。

由于国内外市场对虫草、桑黄的需求量越来越大，致使国内各产地药农掠夺性采集，子实体孢子无法大量形成，结果造成野生虫草、桑黄资源在我国已难觅踪影，即将枯竭。近年来大量的科研工作者对虫草、桑黄的人工栽培、液体发酵技术等方面开展了广泛的研究，但人工栽培、液体发酵产生的虫草、桑黄子实体和菌丝体多糖抗肿瘤等活性有待进一步研究。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤活性多糖组合物的制备方法，通过两类多糖相互协同作用，增强其抗肿瘤活性。体外活性实验表明，本发明产品对人源性结肠癌细胞HT-29、人源性肺癌细胞A549、人源性肝癌细胞HepG2的增殖有显著的抑制作用，且显著高于单一来源多糖的抑制效果，可作为一种辅助治疗肿瘤的药品或保健品。

为了解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：一种具有抗肿瘤活性多糖组合物的制备方法，依次包括以下步骤：

A.将人工培养虫草子实体用70℃-90℃烘干，粉碎成20-80目，蒸馏水90℃-100℃提取4-8h，过滤后滤液用浓度70％-80％的乙醇沉淀，8000-12000rpm离心收集沉淀，复溶于水；

B.将步骤A的产物用分子量10000道尔顿的超滤膜高压过滤，得到透明液体用烘干或冷冻干燥后粉碎得到虫草子实体多糖；

C.在步骤A进行的同时，将液体发酵培养桑黄菌丝体用70℃-90℃烘干，粉碎成20-80目，蒸馏水90℃-100℃提取4-8h，过滤后滤液用浓度70％-80％的乙醇沉淀，8000-12000rpm离心收集沉淀，复溶于水；

D.将步骤C的产物用分子量10000道尔顿的超滤膜高压过滤，得到透明液体用烘干或冷冻干燥后粉碎得到桑黄菌丝体多糖；